REV感染对SPF雏鸡免疫器官及CEF凋亡相关因子表达的影响

来源 :东北农业大学 | 被引量 : 3次 | 上传用户:wwk504
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禽网状内皮组织增生病病毒(REV)能够诱导肿瘤发生和免疫抑制等代表性特征的禽网状内皮组织增生病(RE),目前对于禽养殖业的威胁性较大。探究详细的REV致病机制例如免疫抑制等有助于维护养殖业和净化养殖业环境。本研究以1日龄SPF雏鸡和鸡胚成纤维细胞(CEF)为实验对象,实验分为REV感染组和对照组。两组雏鸡均采用腹腔注射方法,病毒感染组雏鸡经腹腔感染REV稀释液,对照组雏鸡经上述相同途径注射等量灭菌禽生理盐水,于REV感染后第1、3、7、14和21天分别进行实验。使用流式细胞术并采用Anexin V-FITC/PI双重染色方法检测雏鸡免疫器官细胞凋亡动态变化;应用RT-PCR技术检测REV感染雏鸡后免疫器官中Caspase-3和Caspase-8 mRNA表达水平;应用Western Blot检测Caspase-3和Caspase-8蛋白含量。以9胚龄SPF鸡胚制备CEF,将其分为REV感染组和对照组,其中REV感染组CEF于制备后16h使用150μL REV稀释液感染,对照组于细胞制备后16h使用150μL不含血清的DMEM培养液做相同处理,分别于接毒后6、12、24、48和72h提取CEF,并应用与上述SPF雏鸡检测指标相同方法对细胞凋亡及Caspase-3和Caspase-8mRNA表达和蛋白含量的动态变化进行了较系统的检测,主要结果如下:(1)REV感染1日龄SPF雏鸡后第1和7天,其胸腺淋巴细胞凋亡百分比极显著(P<0.01)高于对照雏鸡;脾脏和法氏囊淋巴细胞凋亡百分比分别于病毒感染后1-7天和1—3天极显著(P<0.01)高于对照雏鸡;其他无显著性差异(P>0.05)。(2)CEF感染REV后,其细胞凋亡于6h、24h和72h极显著(P<0.01)高于对照细胞,其他无显著性差异(P>0.05)。(3)REV感染1日龄SPF雏鸡后,其胸腺中Capase-3 mRNA表达量在1-3天及第14天显著(P<0.05)高于对照雏鸡;Caspase-8 mRNA表达量于1-3天显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)升高,在第14天显著(P<0.05)低于对照雏鸡。脾脏中Capase-3 mRNA表达量在1-7天显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)高于对照雏鸡;Caspase-8 mRNA表达量于1-3天极显著升高(P<0.01)。法氏囊中Capase-3 mRNA表达量在1-3天和14-21天明显(P<0.05或P<0.01)高于对照雏鸡;Caspase-8 mRNA表达量于第3天和14-21天显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)升高。其他未见统计学差异(P>0.05)。(4)CEF感染REV后,其细胞中Capase-3和Caspase-8 mRNA表达量分别于12-72h和6-72h显著或极显著(P<0.05 or P<0.01)升高;其他时间点未见统计学差异(P>0.05)。(5)REV感染1日龄SPF雏鸡后,其胸腺中Caspase-3和Caspase-8含量均于3-14天明显(P<0.05 or P<0.01)高于对照雏鸡;脾脏中Caspase-3和Caspase-8含量分别于1-3天和第3天较对照雏鸡明显增加(P<0.05 or P<0.01);法氏囊中Caspase-3和Caspase-8含量分别于第1、7天和1-3天显著或极显著(P<0.05 or P<0.01)高于对照组。其他无统计学差异(P>0.05)。(6)REV感染CEF后,其细胞中Caspase-3和Caspase-8含量分别于12-48h和6-24h极显著高于对照组(P<0.01)。其他检测时间点未见统计学差异(P>0.05)。通过上述被检指标较全面系统的检测,并分析讨论了细胞凋亡与REV感染之间的关系,进而对REV感染引起免疫抑制进一步阐述,为探究REV致病机制及RE防治提供了十分重要的科学实验依据。
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