由人类免疫缺陷病毒感染所引起的艾滋病是威胁人类健康的最严重的病毒性疾病之一,由于目前尚无有效的预防疫苗和治愈药物,HIV筛查成为艾滋病防控工作的重要手段。临床上最常用的HIV筛查方法是ELISA,自1985年美国FDA批准使用第一代ELISA检测试剂以来,至今已经发展到第四代,由最初的HIV抗体检测发展到HIV抗体与HIV-1 p24抗原同时检测,其中p24抗原的引入进一步缩短了HIV-1检测的“窗口期”,但是抗原和抗体的同时检测影响了p24抗原的检测限。因而,有必要进一步优化ELISA诊断试剂中HIV-1 p24抗原的检测。　　 本课题利用噬菌体展示技术,结合pMAL蛋白融合表达纯化系统提供了一种利用多肽辅助p24抗原检测的方法,为ELISA诊断试剂中HIV-1 p24抗原检测的改进提供了实验基础。　　 本论文主要分为以下三个部分:　　 1.利用Ph.D.-7TM Phage Display Peptide Library,以重组HIV-1 p24抗原为靶分子,在固相载体上进行特异性多肽的筛选。在噬菌体加入量一致的情况下,其回收率从第一轮的1.2×10-4％提高至第三轮的3.4×10-2％,与靶分子结合的噬菌体得到明显的富集。　　 2.用ELISA鉴定第三轮筛选到的11个噬菌体克隆,其中10个为阳性结果。DNA测序结果显示,10个阳性克隆中有9个展示同一多肽序列FTTRANA。　　 同时研究了ELISA中噬菌体加入量及多种封闭剂对噬菌体特异性结合能力的影响。其中,噬菌体的加入范围为每孔8.13×1011-1.02×1014 pfu,BSA作为封闭剂时效果最好。　　 3.为了进一步研究所筛选的多肽FTTRANA与HIV-1 p24抗原的结合能力,将编码该多肽的DNA序列克隆至pMAL载体,使多肽融合至MBP的N端,再对融合多肽进行表达、纯化。纯化产物经Western Blot验证为MBP融合多肽。　　 综上所述,本课题利用噬菌体展示技术和pMAL蛋白表达纯化系统得到与HIV-1 p24抗原有一定结合能力的多肽,为多肽辅助p24抗原检测提供了实验基础,对于HIV诊断试剂的改进有一定的应用价值。