目的：　　 肝脏缺血再灌注损伤(Hepatic Isehemic Reperfusion Iniury,HIRI)是肝脏外科疾病中常见的病理过程,在肝脏移植、肝脏良恶性肿瘤、外伤等进行的肝部分切除等需要阻断入肝血流的手术中,缺血再灌注损伤有着重要作用,可使肝解毒能力降低、微循环阻力升高,严重者可引起肝功能的损害甚至肝衰竭。近年研究发现它不仅可以造成肝脏局部的损害,同时激活网状内皮系统释放大量的细胞因子、蛋白水解酶、氧自由基和一氧化氮等进入体循环到达远隔器官如肺、脑、肾等,损伤这些脏器,其术后并发症也不断发生,甚至导致病人死亡。所以对肝脏手术围术期的肝及远隔器官(如脑和肺)的保护方面的研究已越来越受到麻醉医生和外科医生的关注。因此,对HIRI的研究,并从麻醉开始采取有效方法进行肝脏及其远隔器官的保护具有重要的理论意义和实用价值。我们的前期研究表明,异氟烷预处理对大鼠脑直接的缺血再灌注损伤具有保护作用,同时研究还发现异氟烷对脑缺血再灌注损伤的保护作用可能与抑制线粒体内Ca2+超载,抑制线粒体通透性转运通道(MPTP)有关。但临床工作中往往存在某一脏器的直接损伤可能会引起其远隔脏器的损伤,异氟烷预处理除了对受损器官具有保护作用是否对其远隔脏器也有保护作用,其相关研究文献报道还比较少,本实验通过观察在体大鼠肝部分缺血再灌注损伤下外周血中S-100β蛋白含量的变化,结合脑组织线粒体形态学的改变,探讨异氟烷预处理对大鼠肝脏部分缺血再灌注时对远隔器官是否具有保护作用。通过脑线粒体游离钙和线粒体通透性转运通道的变化进一步探讨异氟烷预处理的作用机制。　　 材料与方法：　　 一、实验动物与分组　　 清洁级健康的SD雄性大鼠60只(由中国医科大学盛京医院动物实验中心提供),体重250-350g,随机分成五组,每组12只,假手术组(S组);入腹后只分离肝十二指肠韧带,但不阻断肝门血供:缺血再灌注组(IR组):肝脏缺血60min,再灌注120min;异氟烷预处理组(ISO组):肝脏I/R前60min ISO预处理30min,后在空气中洗脱30min;CsA+ISO组:CsA(MPTP特异性阻滞药)50mg kg-1腹腔内注射,30min后同ISO组。CsA组:I/R前30minCsA50mg kg-1腹腔内注射。　　 二、动物模型的制作　　 参照在体大鼠全肝缺血-再灌注损伤模型的制作方法加以改进,10％水合氯醛(0.35g·kg-1)腹腔内注射麻醉,采用腹部弧形切口,入腹后分离肝十二指肠韧带,应用无创动脉夹阻断肝左叶及中叶血流60min后松开动脉夹,再灌注120min,Iso组于缺血前60min置于实验舱内,持续吹入异氟烷和空气30min,维持舱内浓度在1.2-1.5％左右(Datex-Ohmeda气体监护仪监测),再放入空气中洗脱30min,各组分别于缺血前及再灌注120min后抽取静脉血,取血清-80℃冰箱保存,备用,各组均在再灌注120min后迅速断头取脑,在-4℃的冰水中取脑组织,取部分脑组织2.5％戊二醛固定,制作电镜标本。另一部份置于-80℃液氮保存,用以制备线粒体悬液。　　 三、观察指标和测定方法　　 (一)血清S-1OOβ蛋白含量的测定　　 各组静脉血离心后所得血清置于-80℃的冰箱保存,应用Elisa试剂盒(购自大连生物科技有限公司)按试剂盒所述方法进行测定。　　 (二)脑组织线粒体形态学改变　　 取部分脑组织,2.5％戊二醛缓冲液中固定制成电镜切片,观察线粒体的变化。　　 (三)脑线粒体悬液的制备　　 低温差异法分离线粒体,用分离介质制成悬浮液。取该悬浮液少许用中性红-詹纳斯绿B染色后,在高倍显微镜下观察,被染成亮绿色颗粒即线粒体。整个过程均在0～4℃中进行。　　 四、统计分析　　 所有数据采用SPSS12.0软件进行统计学处理,以均数士标准差((x)±s)表示,组内和组间比较均采用单因素方差分析(one-way ANOVA)和配对t检验(paired-sampie T test),P＜0.05为差异有统计学意义,P＜0.01为差异有显著性。　　 结果：　　 一、外周血中S-1OOβ蛋白含量的变化　　 再灌注后,IR组S-100β蛋白含量显著高于S组(p＜0.01);Iso组与IR组相比S-100β含量明显下降(p＜0.05),CsA+Iso组和CsA组与S组比较显著升高(p＜0.01),与Iso组比较也升高显著(p＜0.05),IR组,CsA+Iso组和CsA组三组之间无显著差异;IR组,CsA+Iso组和CsA组与缺血前比较明显升高(p＜0.01),缺血前S-100β蛋白含量的变化,五组无显著性差异。　　 二、脑线粒体超微结构变化　　 ISO组线粒体结构较完整,嵴及内膜间隙仍清晰可见,与S组比较未见明显损伤,IR、CsA+ISO和CsA组线粒体浑浊肿胀,嵴断裂、溶解,内呈空泡状。　　 三、脑线粒体Ca2+浓度的变化　　 IR组Ca2+浓度明显高于S组和ISO组(P＜0.01),而CsA+ISO组Ca2+浓度明显高于ISO组(P＜0.01);说明ISO预处理抑制了IR后Ca2+浓度升高,而这种作用在事先用mitoKATP特异性阻滞药CsA后被取消。　　 四、MPTP开放程度(AS)的变化　　 IR组有较低的△S值,即较大MPTP开放,与S组和ISO组比较有显著差异(P＜0.01),而CsA+ISO组的△S值明显低于ISO组(P＜0.01)。　　 结论：　　 肝脏部分缺血再灌注对脑有损伤作用,而异氟烷预先吸入对大鼠肝脏部分缺血再灌注时的脑具有一定的保护作用。其作用机制可能与而异氟烷预处理能够减轻大鼠肝脏部分I/R时引起的线粒体Ca2+超载,抑制MPTP的开放有关。