鸭肠炎病毒US2蛋白细胞定位及感染相关功能的研究

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鸭病毒性肠炎(duck viral enteritis, DVE),又名鸭瘟(duck plague, DP),是鸭、鹅及多种雁形目禽类的一种急性、热性、败血性传染病,曾相继在多个国家和地区流行,给养鸭业造成巨大的经济损失。本病病原为鸭肠炎病毒(Duck enteritis virus, DEV),属疱疹病毒科未分类病毒,尚未定亚科及属。疱疹病毒us2基因为病毒复制非必需基因,但对病毒的侵入及细胞间传递有一定的抑制作用。US2蛋白参与病毒的免疫逃避机制,与主要组织相容性复合体特异性结合能诱发其降解,从而抑制抗原向T淋巴细胞提呈。针对US2蛋白的功能研究对进一步了解病毒感染机制有重要意义。本研究以鸭肠炎病毒(DEV) C-KCE株基因组DNA为模板,PCR扩增得到us2 ORF,并对其进行了包括氨基酸同源性、编码蛋白结构及抗原性等较为详尽的生物信息学分析。利用大肠杆菌表达系统pET32a(+)(E. coli Rosetta)获得大小为46 KDa的重组蛋白。将纯化的蛋白免疫家兔,制备兔抗重组US2蛋白多克隆抗体,琼脂扩散试验测定血清效价为1:8。经western blot及间接免疫荧光试验分析此抗体针对DEV US2蛋白有良好的反应性。以制备的兔抗US2蛋白血清作为一抗,与病毒接种的CEF进行间接免疫荧光反应,经激光共聚焦显微镜观察,发现特异性荧光染色主要集中于细胞膜和核周围的胞质区。在接种DEV的鸡胚成纤维细胞培养液中添加US2抗体,分别检测US2蛋白在病毒的吸附、侵入、细胞到细胞间的直接传播中的作用,以及对病毒滴度的影响。结果表明,加入US2抗体实验组与对照组相比,病毒侵入率及形成的噬斑大小有明显差异,但是吸附率差异不明显,说明DEV US2蛋白可能参与病毒侵入及细胞间传递的过程。
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