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胶质瘤是人类最常见的原发性颅内肿瘤,但对其发病机制尚不十分清楚,目前己认识到,胶质瘤是一种多基因异常疾病,和人体其他部位的肿瘤一样,胶质瘤发生发展主要是原癌基因的激活与抑癌基因的失活并由此产生一系列基因异常和动态演进的结果。因此寻找与胶质瘤发病相关的基因,深入了解胶质瘤的分子病理,在此基础上开拓胶质瘤治疗的新策略和靶点,成为胶质瘤研究领域的一项重要内容。 我们以往通过微阵列对胶质瘤基因表达谱的研究表明:隔蛋白家族成员CDC10在胶质瘤中表达明显降低,并经小样本胶质瘤初步验证。隔蛋白家族是细胞内结构蛋白,最早在酵母中被发现,这一家族蛋白因命名混乱,2002年统一以SEPT命名,CDC10被命名为SEPT7。基于对胶质瘤基因表达谱的研究发现,胶质瘤中SEPT7表达降低,为此本课题首先从进一步验证SEPT7在大样本胶质瘤中的表达着手,然后以SEPT7构建体进行治疗胶质瘤的体外实验,最后利用裸鼠荷瘤模型进行了SEPT7构建体治疗胶质瘤的动物实验研究,以期进一步了解SEPT7在胶质瘤中的作用以及对胶质瘤恶性进展的影响。 本课题第一部分采用RT—PCR方法检测47例胶质瘤标本以及4个胶质瘤细胞系中SEPT7的mRNA表达水平,以及免疫组化法研究了肿瘤标本以及组织芯片中SEPT7的表达状况,结果均显示在胶质瘤中SEPT7的表达水平随肿瘤恶性程度增加而明显降低,低恶度胶质瘤与高恶度胶质瘤的mRNA、蛋白表达水平有显著差异;胶质瘤细胞系TJ905、TJ899未检测到SEPT7的表达,U251、TJ862细胞系中SEPT7表达水平较正常组织显著降低。为进一步研究SEPT7对胶质瘤的影响,构建了SEPT7的真核表达载体。经测序与SEPT7的cDNA序列比对,发现一处无义突变,提交Genebank,已被收录,登录号为DQ232879。 在本课题的第二部分,将SEPT7构建体-脂质体复合物直接转染人脑胶质瘤细胞系TJ905、U251,pcDNA3载体转染组为空载对照。G418筛选阳性克隆并应用RT—PCR、免疫荧光和蛋白印迹鉴定转染成功。流式细胞术