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藏药细果角茴香为罂粟科角茴香属(Hypecoum L.)多种植物的干燥根或全草统称,主要分布于东北、华北、及西北地区。细果角茴香是我国传统中藏药,在清热解毒、止痛、消炎、镇咳等方面具有良好功效,其主要化学成分及药理活性成分为四氢异喹啉类生物碱。由于这些生物碱的生物活性显著,因此藏药细果角茴香具有一定的研究价值。现代药理学研究表明这些生物碱具有抗癌、抑菌、抗炎、镇痛等效果,同时对支气管扩张以及中枢神经也具有一定的作用。迄今为止,国内外对细果角茴香以及角茴香属植物的相关研究报道非常有限,而且目前只是对细果角茴香中生物碱的粗提物做了药理实验,很少涉及到分子水平,因此为了进一步综合开发利用藏药细果角茴香及角茴香属植物资源,本文以天然产物化学理论和现代化学分离纯化、鉴定技术对细果角茴香中的化学成分进行了分离制备、结构鉴定以及初步的抗乳腺癌活性实验,主要从以下几个方面对藏药细果角茴香展开了研究: 1、采用试管预试法对藏药细果角茴香中可能存在的各类化学成分进行了系统预试。 预试结果表明:细果角茴香植株中含有酚性成分、生物碱、多糖及其苷类、黄酮及其昔类、强心苷、内酯等,可能含有葸醌类、鞣质等,其中生物碱成分的检出结果尤其明显。参考相关文献,细果角茴香中起主要药理作用的是生物碱类成分,因此细果角茴香中的生物碱成分是本论文的研究重点。 2、在单因素实验基础上,采用响应面法优化了细果角茴香中总黄酮和总生物碱的提取工艺,得到了最佳提取工艺条件。 超声波辅助法提取细果角茴香中总黄酮的最佳工艺条件为:液料比33.0mL/g,乙醇浓度为58%,提取时间为34.5min,在此条件下,总黄酮的提取得率达1.525%。热回流法提取细果角茴香总生物碱的提取优化参数为:盐酸水浓度为2.0%、液料比为45.5mL/g、提取时间为2.2h。在此条件下,细果角茴香总生物的提取得率为1.859%。 3、常规逆流色谱分离生物碱类化合物。 利用常规逆流色谱法分离细果角茴香中的生物碱类成分。溶剂系统为四氯化碳-三氯甲烷-甲醇-0.1M HCl(1.5∶2.5∶3∶2,V∶V∶V),上相作为固定相,下相作为流动相,循环水浴温度为25℃,转速850rpm,流速1.6mL/min,检测波长280nm。经过320min分离从120mg生物碱粗样中分离得到5mg leptopidine,32mgoxohydrastinine,27mg(-)-N-methylanadine,7mg N-feruloyltyramine,3mghypecoleptopine。 4、pH区带结合半制备色谱法分离生物碱类成分。 利用pH区带结合半制备色谱法分离生物碱类成分。逆流色谱的溶剂系统为正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(3∶5∶1∶7,V∶V∶V),上下相分层后,下相加5 mM的HCl作为洗脱酸,上相加10mM的三乙胺作为保留碱,上相作为固定相,下相作为流动相,循环水浴温度为25℃,转速850rpm,流速1.5mL/min,检测波长280nm。经过220min的分离,从1200mg生物碱粗样中分离得到31mg(-)-N-methylanadine,27mg oxohydrastinine,47mg hydroprotopine以及另外两种生物碱的混合物58 mg。然后用半制备色谱法将这两种生物碱分开,得到25mgleptopidine和18mg hypecocarpine。 5、四氢异喹啉类生物碱的抗乳腺癌活性研究。 对得到的两个生物碱类化合物leptopidine和hypecocarpine进行了抗乳腺癌活性研究,并初步探讨了其抗癌机制。结果表明:化合物leptopidine可以显著抑制乳腺癌细胞的生长以及抑制脂肪酸合酶(FAS)的表达。有望经过结构修饰成为一种治疗乳腺癌的有效药物。