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人干扰素α2a(IFNα2a)是人体细胞分泌的一种蛋白质。胸腺肽α1（THYα1）是由胸腺组织上皮细胞分泌的多肽激素。它们具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节活性,研究证明两者的联合使用效果远大于各自单独使用的效果。因此本文考虑通过DNA重组技术将两者构建成一个融合蛋白药物。首先,依据IFNα2a和THYα1的分子结构,设计了一个连接肽,将IFNα2a和THYα1相连,并分别位于该融合蛋白的N端和C端。在此基础上,构建出表达载体pCJ101质粒,转入大肠杆菌E.coli DH5α获得了阳性克隆。 本文还对人干扰素α2a和胸腺肽α1融合蛋白的基因工程菌的培养条件进行了研究,通过考察不同的培养时间、培养基的组成以及无机盐的组成对包涵体产率的影响得出了优化的发酵条件:基因工程菌发酵14h后进入衰退期,因此,发酵14h终止发酵;培养基组成为葡萄糖:3g/L,胰蛋白胨:12g/L,酵母提取物:13g/L;无机盐的组成为NaCl:1.5g/L,NH4Cl:0.8g/L,MgSO4:0.9g/L,CaCl2:12mg/L。 重组蛋白质在大肠杆菌中表达时易形成不溶性、无活性的包涵体,因此,必须经过变性、复性的过程。而稀释复性法是研究其它复性方法的基础,试验中先采用含2mol/L尿素的0.1mol/L Tris-HCl缓冲液对包涵体进行洗涤,然后用含10mmol/L DTT的7mol/L盐酸胍溶解包