NR2B在骨癌痛小鼠的前扣带回和脊髓中的分布与表达

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目的观察骨癌痛小鼠前扣带回(ACC)和脊髓中的N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体2B亚基(NR2B)表达含量的变化及分布情况。方法选用体重约14-18g的成年雄性C57BL/6小鼠81只,随机分为三组,癌痛组(27只);假手术组(27只);正常对照组(27只)。癌痛组接种Lewis肺癌细胞约2×106个;假手术组接种等容积的d-hanks液;接种容积均为10ul。正常对照组不予任何处理。选择术后第6、10、14、18、22天,分别观察3组小鼠白发痛行为及测定机械性触诱发痛。癌痛组、假手术组和正常对照组分别于术后第6、10、14、18、22天各取3只,取前扣带回和L4-L6段脊髓用于做实时定量PCR检测NR2B的表达。癌痛组、假手术组和正常对照组分别于术后第14、18天各取3只,取脑和脊髓做免疫组化检测NR2B的表达;同时每组于术后第14、18天各取3只,取脊髓做Western blot检测NR2B的表达。结果1)癌痛组在术后第6天,术侧后肢有抬足行为,术后第10天左右自发抬足行为明显,且抬足时间在观察期内逐次延长,术后第10、14、18、22天观察到的抬足时间与对照组和假手术组相比均有显著差异(P<0.05)。癌痛组于术后第10天左右出现触诱发痛,第14天左右触诱发痛明显并持续至整个观察期;癌痛组观察期内各时间点与对照组相比,差异显著(P<0.05)。2)L4-L6段脊髓和前扣带回NR2B的实时定量PCR示:癌痛组于术后第6天、10天,L4-L6段脊髓和前扣带回NR2B的表达与正常组和假手术组比较均无显著差异。癌痛组于术后第14天、18天,脊髓和前扣带回NR2B的表达明显增高,与正常组比较,有显著差异(P<0.05);而假手术组与正常组比较无统计学意义(P>0.05)。且于术后第22天,癌痛组前扣带回NR2B的表达含量下降,与假手术组和正常组比较无统计学意义。3)L4-L6段脊髓和前扣带回NR2B免疫组化测定结果:癌痛组NR2B主要分布在脊髓背角浅层、中央导水管、前角以及小鼠的前扣带回,脊髓各层NR2B表达量依次为前角、背角浅层、中央导水管。癌痛组于术后第14、18天,脊髓和手术对侧的前扣带回区NR2B阳性细胞光密度(OD)值与假手术组和正常组比较有统计学差异(P<0.05)。假手术组与正常组比较,NR2B阳性细胞光密度(0D)值无统计学差异(P>0.05)。4)L4-L6段脊髓NR2B表达的Western blot检测结果:癌痛组于术后第14天、18天,脊髓NR2B的表达明显增高,与正常组比较,有显著差异(P<0.05);而假手术组与正常组比较无统计学意义(P>0.05)。结论:1)骨癌痛组脊髓和前扣带回中的NR2B含量表达上调,且同时疼痛行为学也有相应的改变;2)在同一癌痛模型中观察到NR2B在脊髓和前扣带回同时高表达,提示在癌痛的产生和维持中不仅激活了脊髓低位中枢,而且有脑部中枢的参与;3)本研究发现NR2B在脊髓前角细胞表达呈强阳性,为癌痛产生的机制研究和干预提供新的思路。
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