论文部分内容阅读
目的(1)探讨慢性MPTP帕金森病模型小鼠黑质DA神经元减少与NF-κB通路依赖的凋亡蛋白Bcl-xL表达之间的关系。(2)探索NF-κB通路抑制剂(PDTC)在PD预防中的作用。方法本研究采用慢性MPTP帕金森病小鼠(C57/BL)模型,随机将小鼠分成正常组,实验组,预防组,每组40只,均在同等条件下饲养。实验组用小鼠MPTP 25mg/kg腹腔注射,一周两次,持续5周;正常组腹腔注射与实验组等量的0.9%生理盐水;预防组先腹腔注射PDTC 40mg/kg,半小时后注射MPTP25mg/kg。注射完毕后,在不同时间点,观察各组小鼠的行为学、形态学情况;采用免疫组织化学法检测酪氨酸羟化酶和Bcl-xL的表达;采用逆转录聚合酶链式反应方法检测黑质Bcl-xL mRNA表达情况。分析:①神经毒素1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱导的慢性帕金森病(Parkinson’s disease,PD)模型小鼠,黑质Bcl-xL表达及时间依赖性关系,了解NF-κB通路对DA神经元凋亡的调控作用;Bcl-xL表达与黑质DA神经元减少以及与小鼠行为学反应的一致性关系。②NF-κB(Nuclear factor-kappaB)通路抑制剂-二硫代氨基甲酸毗咯烷(pyrrolidine dithiocarbamate, PDTC)对Bcl-xL表达及黑质多巴胺神经元数目的影响。结果(1)行为学观察结果:与对照组比较,实验组小鼠出现震颤、竖毛、流涎、活动减少、动作缓慢等异常行为,爬杆时间明显延长(P<0.05),预防组出现部分症状,较实验组明显减轻。(2)形态学改变:HE染色法染色后,与对照组相比,实验组黑质区多巴胺能神经元细胞数量明显减少(P<0.05),而预防组神经元减少没有实验组明显(P<0.05),但仍未达到对照组水平(P<0.05)。(3)SABC免疫组化法结果:处理完毕后,在12h～24h时,实验组黑质区Bcl-xL蛋白较对照组表达增高,与其平均光密度(MOD)差别有统计学意义(P<0.05);1w～2w时,Bcl-xL表达较24h减少(P<0.05)。实验组较对照组TH阳性细胞减少(P<0.05) ,且在12h～24h时,TH阳性细胞较1w～2w增加(P<0.05)。预防组结果与实验组恰恰相反。(4)RT-PCR结果:在12h时,实验组中脑黑质Bcl-xL mRNA表达较对照组增加(P<0.05),在24h时表达达到高峰,1w～2w时,其表达较对照组减少(P<0.05)。预防组与实验组出现相反结果。结论(1)实验结果显示:慢性MPTP帕金森病C57BL小鼠模型中,NF-κB通路介导的Bcl-xL表达参与了对DA神经元凋亡的调控。(2)实验结果表明:NF-κB通路对Bcl-xL的调控表现为双向性,且这种作用具有时间依赖性,但最终导致DA神经元减少。(3)NF-κB通路抑制剂(PDTC)在PD预防中有作用。