清热解毒化浊片对ETM兔肝损伤TLR4/NF-κB信号通路及下游因子作用的研究

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目的:从血液细胞分析、病理形态学、免疫组化等方面研究清热解毒化浊片对ETM兔肝损伤TLR4、NF-κB、TLR4/NF-κB信号通路下游因子IL-2、IL-6、IL-8、1L-10以及血常规、血清内毒素水平的影响,探讨清热解毒化浊片的作用机制。方法:本研究将25只健康新西兰白兔完全随机分为5组,即空白组、1阶段模型组,1阶段清热解毒化浊片组(下称1阶段化浊片组)、2阶段模型组,2阶段清热解毒化浊片组(下称2阶段化浊片组),每组5只。1阶段模型组,2阶段模型组及1阶段化浊片组,2阶段化浊片组沿耳缘静脉注射大肠杆菌内毒素10μg/ml/kg,空白对照组注射1ml/kg生理盐水。每20分钟测量体温一次,并记录开始发热时间。开始发热时空白对照组及1阶段模型组,分别灌入纯净水10ml/kg;1阶段化浊片组,灌入清热解毒化浊片药液10ml/kg。注入大肠杆菌2小时,空白组及2阶段模型组分别灌入纯净水10ml/kg、2阶段化浊片组分别灌入清热解毒化浊片药液10ml/kg。灌胃后每0.5小时测量体温一次。每组于灌胃2小时后将各组家兔行心脏采血,处死取肝脏标本,以4%多聚甲醛溶液固定,备石蜡切片及病理镜检用。心脏采血检测血常规、肝功能、CRP、IL-2、IL-6、IL-8、IL-10,取肝脏组织HE染色观察肝脏组织形态学病理形态的变化,用免疫组化法观察各组肝脏TLR4、NF-κB的表达情况。结果:(1)、2阶段化浊片组与2阶段模型组比,WBC上升,具有显著性意义(p<0.05)。1阶段化浊片组与1阶段模型组,WBC上升具有显著性意义(p<0.05)。1阶段化浊片组与1阶段模型组比,2阶段化浊片组与2阶段模型组比,内毒素水平均有下降,有显著性意义(P<0.05);(2)、2阶段化浊片组与2阶段模型组比, IL-2浓度明显下降差距具有显著性意义(p<0.05);2阶段化浊片组与2阶段模型组比,IL-2浓度明显下降,差异具有显著性意义(p<0.05);2阶段化浊片组与2阶段模型组比,IL-6浓度明显下降,差异具有显著性意义(p<0.05);2阶段化浊片组与2阶段模型组比,IL-8浓度明显下降,差异具有显著性意义(p<0.05);’2阶段化浊片组与2阶段模型组比,IL-10浓度明显下降,差异具有显著性意义(p<0.05);2阶段化浊片组与2阶段模型组比, CRP明显下降,差异具有显著性意义(p<0.05);1阶段化浊片组与1阶段模型组比, CRP无明显下降;(3)、1阶段化浊片组以及2阶段化浊片组TLR4、NF-κBp表达较模型组明显减少,1阶段化浊片组与1阶段模型组比,TLR4平均光密度值明显下降,差距具有显著性意义(p<0.05);2阶段化浊片组与2阶段模型组比,NF-K Bp65平均光密度值明显下降,差距具有非常显著性意义(p<0.01)。2阶段化浊片组较1阶段化浊片组在NF-κBp65的表达方面下降更明显。结论:1.清热解毒化浊片对ETM肝损伤的作用可能与阻止炎症反应以及清除内毒素有关;2.清热解毒化浊片对ETM肝损伤的作用可能与下调TLR4、NF-κB表达有关;3.清热解毒化浊片对ETM肝损伤的作用可能与调节CRP与TLR4/NF-κB信号转导通路下游IL-2、IL-6、IL-8以及IL-10有关。
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