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目的:通过研究经门、腔静脉途径注入内毒素后所致急性肺损伤的差异,以揭示肠源性内毒素血症早期肝脏与肺损伤的关系。方法:72只健康清洁级SD大鼠,体重220g±20g,将动物随机分为2组(采用随机数字表法):对照组(异硫氰酸荧光素组FITC,F组,36只),内毒素组(异硫氰酸荧光素-内毒素组FITC-LPS,L组,36只);F组和L组再分为门静脉亚组(M组,18只)和腔静脉亚组(Q组,18只);每个亚组再按15min、30min、60min分为12个次亚组,每个次亚组6只大鼠。F组大鼠经门、腔静脉注射FITC-0.9%氯化钠溶液1ml;L组大鼠经门、腔静脉注射FITC-LPS-0.9%氯化钠溶液1ml。各组按3个时间点心脏取血测定血浆LPS含量、血浆克拉拉细胞蛋白(CC16)含量、血浆TNF-α含量;处死动物后取肺组织,检测大鼠肺组织含水量(左肺湿/干比);经荧光显微镜下观察肺组织荧光标记的内毒素分布;HE染色光镜下观察肺组织损伤程度;采用免疫组化法测定肺组织克拉拉细胞蛋白(CC16)的表达;透射电镜下观察克拉拉细胞(Clara cells)的超微结构。结果:1.大鼠血浆内毒素含量:与对照组相比,内毒素组明显高于对照组,比较有统计学意义(P<0.05)。LM组与LQ组比较,LM组血浆内毒素含量较LQ组明显减少,在各个时间点二者的差异均有统计学意义(P<0.05)。2.大鼠血浆克拉拉细胞蛋白(CC16)含量:内毒素组高于对照组,比较有统计学意义(P<0.05)。LM组与LQ组比较,LM组血浆中CC16含量较LQ组高,在3个时间段均有统计学意义(P<0.05)。LM组与LQ组中30min-60min CC16含量增长的速度均低于15min-30min CC16含量增长的速度。3.大鼠血浆TNF-α含量:L组高于F组,比较有统计学意义(P<0.05)。LM组血浆TNF-α含量比LQ组高,在15min、30min、60min差异均有统计学意义(P<0.05)。4.大鼠肺组织荧光标记的内毒素检测:与F组比较,L组荧光素表达量多,随时间递增,LQ组荧光素表达明显高于LM组。5.大鼠肺组织含水量(左肺湿/干比)检测:与对照组相比,内毒素组高于对照组,比较有统计学意义(P<0.05)。LM组与LQ组比较,LM组肺组织含水量较LQ组高,15min、30min、60min有统计学意义(P<0.05)。6.HE染色光镜观察肺脏组织损伤:F组肺泡结构完整,肺泡囊清晰,肺泡间隔正常。15min时,LM组中性粒细胞及巨噬细胞浸润明显;LQ组肺泡上皮细胞水肿,肺泡隔增宽;30min时,LM组肺泡内大量炎性细胞渗出、水肿、出血,肺泡隔增宽,淋巴滤泡形成;LQ组肺泡上皮中度水肿,肺泡扩张,少量炎性细胞浸润。60min时,LM组和LQ组肺泡结构消失,肺泡实变、扩张,大量中性粒细胞及巨噬细胞浸润,细胞明显水肿。LM组比LQ组比较,LM组肺损伤程度严重,损伤评分有统计学差异(P<0.05)。7.肺组织克拉拉细胞蛋白(CC16)免疫组化:在肺脏中,阳性染色为细胞浆呈棕黄色,即为大鼠肺脏克拉拉细胞蛋白(CC16)。与L组比较,F组评分明显升高,呈中度阳性表达,差异有统计学意义(P<0.05)。LM组与LQ组比较,各时间点两组均呈弱阳性,LQ组评分均高于LM组,差异有统计学意义(P<0.05)。8.透射电镜观察肺脏Clara细胞的超微结构:FM组和FQ组透射电镜下Clara细胞超微结构:胞体大,呈圆形或椭圆形,细胞表面有少量的短小微绒毛,细胞顶端呈帽状突入管腔。Clara细胞胞质内有较多滑面内质网、核糖体及线粒体。细胞胞质内含有膜包绕的、电子密度均匀的致密颗粒,这些致密颗粒即为Clara颗粒,可见颗粒边移,与细胞顶部的胞膜相贴。LM组和LQ组60min时Clara细胞超微结构显示:Clara细胞变性明显,核皱缩,核膜内陷,核周间隙消失,胞质内线粒体、滑面内质网、分泌颗粒均减少,胞质内Clara颗粒密度不均匀、呈脱颗粒状态。结论:1.肠源性内毒素血症早期即引发严重肺损伤,其原因可能与枯否氏细胞被激活,大量致炎因子的“瀑布”样释放有关。2.内毒素对肺脏的直接刺激,可能涉及其对肺脏保护体系的预启动等。