目的:考察腺苷蛋氨酸配伍美洛昔康对碘乙酸诱导的大鼠膝骨关节炎的影响,研究对大鼠诱导性骨关节炎的治疗作用并探讨其相关作用机制;观察腺苷蛋氨酸、美洛昔康及其两者配伍对多重疼痛的影响,并探讨其作用机制;考察腺苷蛋氨酸的吸湿性、美洛昔康增溶剂的选择、以及复方颗粒综合流动性、成型性、粒径分布等指标,确定治疗骨性关节炎的复方肠溶胶囊的处方组成和制备工艺,制备该复方肠溶胶囊;通过对处方临界相对湿度的测定,为制剂生产过程中生产环境湿度的控制提供参考;进行三批放大试验,验证制剂工艺的可行性;建立治疗骨关节炎复方肠溶胶囊的质量控制方法。方法:(1)腺苷蛋氨酸配伍美洛昔康对膝骨关节炎治疗作用的研究:昆明种小鼠,适应性喂养1w后,按体重匹配随机分为7组,通过小鼠热板法、扭体法实验,观察腺苷蛋氨酸、美洛昔康及其两者配伍对小鼠疼痛的影响。Wistar大鼠,普通饲料喂养1w后,随机分为7组,灌胃给药21 d后,以3%戊巴比妥钠腹腔注射浅麻,单侧膝关节腔内注射碘乙酸钠(MIA)诱导大鼠OA模型,评价不同时间点大鼠平均关节炎指数(MAI);光镜观察大鼠膝关节软骨和滑膜的组织病理学改变;ELISA法检测血清和关节液中一氧化氮(NO)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量及血清中软骨寡聚基质蛋白(COMP)、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)含量。(2)治疗骨关节炎复方肠溶胶囊制备工艺的研究:以微晶纤维素、乳糖、微粉硅胶、β-环糊精、淀粉为辅料制粒,以吸湿性为指标筛选腺苷蛋氨酸抗吸湿性辅料的种类及用量;以泊洛沙姆188(F68)、聚乙烯吡咯烷酮k30(PVP-k30)为辅料,以溶出度为指标筛选美洛昔康增溶剂的种类及用量;以胶囊内容物的流动性、粒径分布、成型性为指标,筛选复方最佳的制备工艺,最终确定治疗骨关节炎复方肠溶胶囊的处方组成。按照确定的制备工艺流程,生产3批,进行放大研究。按照2010版《中国药典》的方法,对3批样品进行常规项检查。(3)治疗骨关节炎复方肠溶胶囊质量控制方法的研究:采用化学法、紫外可见分光光度法、高效液相色谱法对复方中腺苷蛋氨酸和美洛昔康进行鉴别;采用HPLC法进行复方中腺苷蛋氨酸和美洛昔康的含量测定;进行方法学考察;采用桨法在pH为1.2和6.8的溶出介质中进行药物体外释放度考察,最终建立治疗骨关节炎复方肠溶胶囊的质量控制方法。结果:(1)腺苷蛋氨酸配伍美洛昔康对膝骨关节炎治疗作用的影响:腺苷蛋氨酸配伍美洛昔康不同配比均可不同程度延长小鼠热板反应和扭体反应潜伏期,其中,高剂量组能显著抑制热刺激和化学刺激所致的疼痛。腺苷蛋氨酸、美洛昔康及两者配伍均可不同程度减轻OA大鼠膝关节炎症症状;改善膝关节软骨和滑膜的病变;降低大鼠血清和关节液中IL-1β、TNF-α、NO含量;降低大鼠血清中COMP、MMP-3含量,对MIA所致的骨关节炎有明显的治疗作用。(2)治疗骨关节炎复方肠溶胶囊制备工艺的研究:最终选定微晶纤维素和乳糖为腺苷蛋氨酸的抗吸湿辅料,用量配比为SAMe∶MCC∶乳糖为14∶5∶2;选定泊洛沙姆188为美洛昔康的增溶剂,用量配比为MLX:F68为5∶3;制备工艺流程:F68溶解于适量无水乙醇,置于相应MLX固体粉末中,充分搅拌,40℃水浴蒸干无水乙醇,真空干燥器干燥,研磨,过100目筛备用,以MCC、乳糖、SAMe原料粉过100目,按比例称量、混合,以98%乙醇制软材,24目制粒,减压干燥,24目整粒,添加0.15%微粉硅胶助流,填充于肠溶胶囊壳中。制备的药物颗粒具有良好的流动性和成型性,粒径分布均匀,临界相对湿度为78.5%,装量差异及含量均匀度检查均符合要求。(3)治疗骨关节炎复方肠溶胶囊质量控制方法的研究:采用HPLC法测定复方肠溶胶囊中腺苷蛋氨酸和美洛昔康的含量,方法学验证结果表明,方法稳定、准确、重现性好。体外释放度试验表明,三批样品中腺苷蛋氨酸和美洛昔康2h内在pH为1.2的溶出介质均无溶出,45min内在pH为6.8的溶出介质中的释放量均符合相关规定。结论:腺苷蛋氨酸配伍美洛昔康对热刺激和化学刺激所致的疼痛有效。腺苷蛋氨酸能在一定程度延缓和抑制OA大鼠软骨退行性改变和滑膜炎症,具有防治骨关节炎的作用;配伍美洛昔康后可进一步增强疗效,其作用随腺苷蛋氨酸剂量的增加而增强;其作用机制可能与降低血清中COMP、MMP-3含量从而降低关节软骨的破坏、改善软骨和滑膜病变、减少血清和关节液中主要炎症细胞因子有关。治疗骨关节炎的复方肠溶胶囊制备工艺稳定可行,质量稳定可控,且体外溶出试验显示具有良好的肠溶性能,适合于后期工业化生产。所建立的高效液相色谱方法准确、稳定、重复性好,可作为复方中腺苷蛋氨酸和美洛昔康的含量测定方法。