【摘 要】
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中心体是动物细胞中非常重要的无膜包被的小体积细胞器,它除了作为微管组织中心在有丝分裂中具有指导纺锤体组装的功能外,还参与了细胞质分裂、细胞周期进程等细胞内的许多生
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中心体是动物细胞中非常重要的无膜包被的小体积细胞器,它除了作为微管组织中心在有丝分裂中具有指导纺锤体组装的功能外,还参与了细胞质分裂、细胞周期进程等细胞内的许多生命活动过程。中心体的稳定性可能与肿瘤的发生和发展有着密切的关系。随着对中心体的深入研究,人们逐渐发现越来越多的中心体蛋白和中心体相关蛋白,这些蛋白在调解中心体稳定性中发挥着重要作用,引起了更多的注意。目的:BACP是位于20p11.22-p11.1的人类未知功能的基因,前期的研究表明:BACP定位于中心体,与抑癌基因BRCA1相互作用。为了探讨BACP的功能,我们将BACP表达载体转入KYSE150细胞株,筛选高表达BACP的单克隆,扩增后构建稳定表达BACP的细胞株。试图通过这株细胞在某些生物学行为、抗凋亡能力和裸鼠致瘤等方面的差异的研究来探讨BACP在肿瘤的发生、发展中的作用机制。方法:一、分别将pEGFP -C3-KIAA0980和pEGFP-C3转入KYSE150细胞株,构建稳定高表达BACP的细胞株和空载体细胞株。比较两株细胞在生长速度、穿膜能力和黏附能力等方面的差异。二、分别用一定计量的紫外线照射两株细胞,进行克隆培养,比较其克隆存活率;用细胞免疫荧光的方法观察细胞核形态的变化;用Western blotting方法检测PARP-1和caspase-9蛋白剪切程度;使用流式细胞仪技术观察细胞凋亡率。综合四方面结果比较各细胞株在紫外线照射后的凋亡水平。另外用一定浓度顺铂处理各细胞株,用Western blotting方法检测PARP-1蛋白的剪切程度,比较各细胞株在顺铂处理后的凋亡水平。三、分别将两株细胞注射到裸鼠皮下,观察肿瘤生长速度和转移情况。90天处死裸鼠,取其肿瘤、肝、肺、脾、肾及其他器官福
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