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目的:研究RNA聚合酶相关因子复合物(PAFc)在肝癌细胞中潜在的相互作用蛋白,为进一步理解PAFc在肝癌细胞中调控基因表达的分子机制提供实验依据。 方法:利用免疫共沉淀技术纯化肝癌细胞中PAFc潜在的相互作用蛋白,经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离后,通过胶内酶解和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱分析方法鉴定潜在的PAFc相互作用蛋白。从中选择感兴趣的蛋白并在293T细胞中过表达,通过免疫沉淀技术和Western blot实验验证该蛋白与PAFc之间的相互作用。 结果:1.通过免疫共沉淀技术和质谱分析方法筛选并鉴定了PAFc相互作用蛋白,并选择Fli1和SALL4为目标蛋白。2.在293T细胞中高效表达了Fli1-Flag蛋白和SALL4-HA蛋白。3.利用免疫沉淀技术和Western blot实验验证出SALL4与PAFe之间存在相互作用。 结论:1.本研究利用免疫共沉淀技术和质谱分析方法在肝癌细胞中鉴定了SALL4蛋白为PAFc的相互作用蛋白,为进一步研究PAFc在肝癌细胞中调控基因表达的分子机制提供了实验依据。2.PAFc与SALL4蛋白在肝癌细胞中相互作用,可能与肝癌的发生、发展有关。