【摘 要】
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抗生素耐药性问题目前已经成为困扰全人类的世界性难题,而食品中抗生素残留不仅会加剧耐药性问题,而且会直接对人体健康造成极大危害。所以对食品中抗生素残留的快速、便捷、
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抗生素耐药性问题目前已经成为困扰全人类的世界性难题,而食品中抗生素残留不仅会加剧耐药性问题,而且会直接对人体健康造成极大危害。所以对食品中抗生素残留的快速、便捷、廉价和灵敏检测对抗生素耐药性问题的解决具有重要意义。适配体是一类具有特异性亲和能力的DNA或RNA短核酸链,已广泛应用于食品安全、环境监测、临床诊断和治疗等领域。相比较于传统蛋白质抗体,适配体作为特异性识别元件,具有靶标范围广、易化学合成、化学稳定性好、易修饰等特点,以其为基础的生物传感器已用于检测细菌、蛋白质、病毒、药物、毒素和食品添加剂等。本研究为实现食品中氯霉素和卡那霉素的共检测提供了一种新的思路。首先,搭建由两条适配体核酸链和一条辅助核酸链组成的适配体检测体系,当氯霉素或卡那霉素存在时,由于适配体与靶物抗生素之间的特异性亲和作用,对应适配体会被竞争洗脱下来。其次,借助实时荧光定量PCR,根据实验组与对照组达到荧光阈值循环数即Ct值的差异,对适配体核酸链进行定量分析,从而实现对抗生素的定量检测。本研究中建立的抗生素共检测器可以实现氯霉素的检测限(LOD)为6.13 ng/mL以及卡那霉素的LOD为19.17 ng/mL。此外,本课题还对靶向两种抗生素的适配体单检测体系的检测限分别进行了测定,其中氯霉素单检测体系的LOD为3.58 ng/mL,而卡那霉素单检测体系的LOD为5.56 ng/mL。并对两种适配体检测体系进行了圆二色谱测定,深入探究了两种不同检测器之间的检测性能差异的原因。
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