随着我国集约化水产养殖的迅猛发展,水产养殖取得了良好的经济效益和社会效益,然而伴随水产养殖业的迅猛发展,养殖规模的不断扩大,水体的污染,使各种疾病也随之而来,其病害问题日趋突出,严重制约了该产业的健康发展。且人们对水产品的质量要求也越来越高,不但对水产品要求无公害的绿色产品,对水产消毒剂更倾向于高效、低毒、无公害方向发展,新型的消毒剂得到了广泛应用。季铵盐碘消毒剂是由季铵盐类化合物与碘络合而成,其中表面活性剂季铵盐能改变细胞膜通透性、破坏菌体酶系统,影响病原体新陈代谢,起到载体与助透作用。且与碘络合后,性温和,稀释后碘和表面活性剂仍紧密结合,保证了碘的稳定性和杀菌性。该消毒剂是一种复方消毒剂,能杀灭包括细菌、霉形体等在内的大部分病原微生物,且不受光、热、温度、有机物、pH以及水质的影响,可长期储存效力不减,对所消毒对象无腐蚀性和刺激性,目前已被畜禽,水产养殖等养殖户广泛使用。季磷盐是近年来发展的新一代表面活性剂,具有较好的杀菌性能,被誉为传统的季铵盐类杀菌剂的换代产品,水产消毒剂也由季铵盐类向季磷盐类转变。季磷盐碘是季磷盐消毒剂络合碘类消毒剂的产品,具有高效、广谱、低毒、低剂量、宽pH使用范围和化学稳定性好等优点,越来越广泛的应用于特种水产的养殖中。科学的使用消毒剂对水产养殖中疾病的控制和预防以及消灭传染源、改善水质都有积极的意义,但研究发现各种消毒剂对养殖对象都有一定的毒性,肝脏是脊椎动物最大的解毒和营养代谢器官,是目前药理学、毒理学和生理学等研究的主要对象,并且已有大量的研究表明,体外培养的肝细胞检测毒性的方法具有活体动物所不具有的许多优点,如细胞的均一性好,在遗传上极为相似；药物与细胞直接作用,反应速度快；可结合多种技术方法测知药物效应；比用活鱼更经济、方便等,可作为活体肝组织替代模型应用于药理、毒理、生理等方面的研究。本研究采用不同肝细胞分离方法,比较了不同分离方法对的体外培养肝细胞的数量、活力及增殖能力的影响,建立肝细胞体外培养体系,然后以鲫(Carassius auratus)、黄鳝(Monopterus albus)、达氏鲟(Acipenser dabryanus)的体外培养肝细胞作为体外模型,利用MTT法分别研究季铵盐碘和季磷盐碘对三种鱼类肝细胞的细胞毒性,探讨两种消毒剂的对养殖鱼类的潜在毒性,主要研究结果如下：(1)分离方法对黄鳝肝细胞活性的影响采用组织块贴壁法及酶消化法(胰蛋白酶、胶原酶、胰蛋白酶-EDTA、胰蛋白酶-EDTA-胶原酶)对分离的黄鳝(Monopterus albus)肝细胞的细胞数量、细胞活力和细胞增殖能力的影响。结果表明,酶消化法优于组织块贴壁法,其中胰蛋白酶-EDTA-胶原酶分次消化法所获得细胞数量最多为(1.30±0.06)×107个/g,胰蛋白酶消化法所得细胞活力最高为(90.2±1.2)%,胰蛋白酶-EDTA-胶原酶分次消化法所获得活细胞数量最多为(1.10±0.05)×107个/g。细胞增殖能力呈现先升后降的趋势,在48h细胞数量最多,144h后细胞数量明显下降。(2)3种鱼类肝细胞体外培养体系的建立采用胰蛋白酶消化法和MTT法建立了3种鱼类的体外毒性检测体系,结果表明采用0.25%胰蛋白酶,25℃下消化0.5-1h或在4℃下消化16-18h后调整细胞密度为5×105个/mL,接种96孔板进行培养24h后加入消毒剂进行毒性检测,其中MTT的反应时间4小时,终浓度为1mg/mL。(3)季铵盐碘对3种鱼类肝细胞的毒性研究采用3种鱼类的体外肝细胞毒性检测模型,采用MTT法研究了季铵盐碘对3种鱼类肝细胞的24h毒性,结果表明随着季铵盐碘浓度的增加,3种鱼类肝细胞的细胞存活率均下降；在季铵盐碘浓度为1.56×10-4ml/L时,鲫肝细胞存活率为95.80±13%,与对照组相比有显著性差异,细胞存活率与季铵盐碘的浓度的自然对数在一定范围内呈良好的线性关系,其回归方程为y=.8.4911n(x)+8.2236(R2=0.9931),其IC50=7.303×10-3ml/L;在季铵盐碘浓度为1.56×10-4ml/L时,黄鳝肝细胞存活率为97.10±2%,与对照组相比有显著性差异,细胞存活率与季铵盐碘的浓度的自然对数在一定范围内呈良好的线性关系,其回归方程为y=-10.561ln(x)+2.2904(R2=0.9919),其IC50=1.092×10-2ml/L;在季铵盐碘浓度为4.70×10-4ml/L时,达氏鲟肝细胞存活率为89.28±2%,与对照组相比有显著性差异,细胞存活率与季铵盐碘的浓度的自然对数在一定范围内呈良好的线性关系,其回归方程为y=.10.42ln(x)+3.5972(R2=0.9953),其IC50=1.162×10-2ml/L;根据其IC50可知,季铵盐碘对3种鱼类的毒性大小为鲫>黄鳝>达氏鲟。(4)季磷盐碘对3种鱼类肝细胞的毒性研究采用3种鱼类的体外肝细胞毒性检测模型,采用MTT法研究了季磷盐碘对3种鱼类肝细胞的24h毒性,结果表明随着季磷盐碘浓度的增加,3种鱼类肝细胞的细胞存活率均下降；在季磷盐碘浓度为6.72×10-5ml/L时,鲫肝细胞存活率为93.11±8%,与对照组相比有显著性差异,细胞存活率与季磷盐碘的浓度的自然对数在一定范围内呈良好的线性关系,其回归方程为y=-9.00921n(x)-1.7095(R2=0.9914),其IC50=3.217×10-3ml/L;在季磷盐碘浓度为6.27×10-5ml/L时,黄鳝肝细胞存活率为87.12±3%,与对照组相比有显著性差异,细胞存活率与季铵盐碘的浓度的自然对数在一定范围内呈良好的线性关系,其回归方程为y=-10.0971n(x)-6.372(R2=0.9842),其IC50=3.763×10-3ml/L;在季磷盐碘浓度为6.27x10-Sml/L时,达氏鲟肝细胞存活率为95.05±5%,与对照组相比有显著性差异,细胞存活率与季磷盐碘的浓度的自然对数在一定范围内呈良好的线性关系,其回归方程为y=-8.8751n (x)+6.8141(R2=0.9968),其IC50=7.700×10-3ml/L;根据其IC50可知,季铵盐碘对3种鱼类的毒性大小为鲫>黄鳝>达氏鲟。