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牛奶是人们日常生活中的必需组成部分,然而牛奶及其制品的质量安全问题时有发生。牛奶的兽药残留主要来自于奶牛的疾病预防及治疗过程中所使用的药物。牛奶中兽药超标后会产生多种危害:如牛奶发酵异常;过敏;菌群失调;甚至会致畸、致癌、致突变;破坏生态环境;影响畜牧业的发展等。欧盟、日本、加拿大、中国等国家已经建立了部分兽药在动物性食品中的最大残留限量(MRLs),以此来监管食品的安全性。本文采用高效液相色谱-三重四极杆质谱(HPLC-MS/MS)为检测手段,对牛奶中25种兽药(8种β-内酰胺类、5种喹诺酮类、5种β-受体激动剂类、3种氯霉素类、3种糖皮质激素类及呋喃唑酮)定量分析方法进行了研究及确证。具体内容如下:一、建立了LC-MS/MS同时检测牛奶样品中25种兽药的方法综合考虑六类兽药的理化性质,经多次优化,最终确定的定量方法如下:牛奶样品用乙腈提取,提取液经正己烷除去其中的脂溶性杂质,脱脂步骤重复一次,经35℃氮吹仪蒸干,残渣用乙腈-水(V:V=5:95)溶解,所得溶液经高速离心机离心除去杂质,过0.22μm有机滤膜。用乙腈(0.1%甲酸)-水体系进行梯度洗脱,采用Waters X-Bridge C18(5.0 um,2.1 mm×100 mm)色谱柱进行分离,以多反应离子监测方式,在正、负离子模式同时扫描下,用HPLC-MS/MS法进行检测,外标法定量。为了确保该方法对25种分析物至少在最大残留限量时有足够高的灵敏度,根据欧盟委员会决议2002/657/EC完成方法确证,包括特异性、确定限(CCα)、检测容量(CCβ)、回收率、精密度、准确度、线性及稳定性等项目。验证结果为:恩诺沙星、氧氟沙星、氯霉素、氢化可的松、地塞米松、氟苯尼考在0.1~10ng/mL,沙丁胺醇、特布他林、环丙沙星、诺氟沙星、司帕沙星在0.2~50 ng/mL,莱克多巴胺、氯丙那林、泼尼松、甲砜霉素、氨苄西林、苯唑西林、氯唑西林在0.5~50 ng/m L,克伦特罗、哌拉西林、头孢哌酮在1~100 ng/mL,青霉素G、头孢唑林在4~256 ng/mL,呋喃唑酮在4~128 ng/mL,头孢氨苄在12~384 ng/mL范围内线性良好;在牛奶中规定有MRLs值的分析物,其CCα在0.32~113.68μg/kg之间,CCβ在0.36~125.75μg/kg之间;在牛奶中无MRLs值的分析物,其CCα在0.01~2.80μg/kg之间,CCβ在0.01~3.09μg/kg之间;25种分析物在低、中、高三个加标水平下的绝对回收率分别在65.9%~123.5%之间,相对标准偏差均低于7.76%,准确度在85.08%~114.6%之间,日内和日间精密度的相对标准偏差均在0.89%~11.03%之间,且加标样品在-20℃放置3天和7天均稳定。方法学验证表明本方法对25种兽药的浓度测定准确可靠。二、运用LC-MS/MS分析方法对市面上的牛奶进行检测从市场购置四种品牌共20份的牛奶样品,依照文中牛奶样品预处理方法处理后,经液质分析。发现3份阳性样品,其中两份样品检出了氯丙那林,不合格。