【摘 要】
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以自行培养的蓝隐藻(Chroomonas placoidea)为材料,经过压力破碎和高速离心分离去除膜成分,得到的上清液分别采用70%、80%、90%和100%的硫酸铵分级沉淀藻蓝蛋白(PC),经两次分
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以自行培养的蓝隐藻(Chroomonas placoidea)为材料,经过压力破碎和高速离心分离去除膜成分,得到的上清液分别采用70%、80%、90%和100%的硫酸铵分级沉淀藻蓝蛋白(PC),经两次分子筛层析纯化,PC的A646/A280>7,经中性PAGE和HPLC检测其纯度,发现不含杂蛋白。通过研究PC及其亚基在不同pH条件和尿素变性剂中的稳定性,摸索亚基变性条件,采用SephacrylS-100柱层析分离得到了富含β亚基的蓝色SG组分和富含α亚基的绿色SG组分。同时结合尿素-SPS-PAGE、二维电泳、聚酰胺薄膜层析等技术,对各级PC沉淀以及分离后的亚基组分的吸收光谱、荧光谱、亚基组成、亚基等电点以及亚基N-末端氨基酸组成等进行了测定和分析。实验结果显示,纯化的蓝隐藻PC至少含有4种发光亚基,分别命名为β1(20.3kDa),β2(16.7kDa),α1(9kDa)和α2(8.3kDa),其中微酸性的β2发光亚基是文献中没有报道的。β1和β2亚基的等电点处于6.0和5.7附近的微酸性区;α2亚基等电点在7.1附近;而α1亚基则是一个等电点为9.1的碱性亚基。因此这些亚基可借助静电力彼此结合,在水溶液中形成分子量大小不等、亚基比例不尽相同的PC复合物形式;此外二维电泳及N-末端结果提示蓝隐藻PC中可能还结合有一些低丰度的无荧光蛋白,可能在PC的亚基组装和复合物形成中担负一定的作用。
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