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目的:通过激活患者自身免疫系统,诱导特异性细胞免疫,可以增强机体的抗癌能力,阻止肿瘤的生长、扩散和复发,以达到清除或控制肿瘤的目的。近几年研究发现被肿瘤特异性抗原调节T细胞(Treg)激活的反调节效应T细胞在肿瘤治疗的作用上有重要的抑制作用。本文旨在检测肿瘤患者外周血T淋巴细胞的体外增殖活化情况,同时分析其活化前后FOXP3以及Fas∕FasL的表达。为临床肿瘤患者的免疫治疗提供理论基础。方法:本研究在苏大免疫所自行研制的鼠抗人CD28激发型单克隆抗体(2F5)的基础上,采用腹水诱生法及免疫亲和层析法进行单抗的获取和纯化,Ficoll密度梯度离心法获取肿瘤患者外周血T淋巴细胞。利用CD3单抗联合CD28单抗体外活化T淋巴细胞。MTT法检测T细胞的增值效应,ELISA法检测活化T淋巴细胞培养上清中IL-2、及IL-10的分泌,免疫荧光及流式细胞术分析其经激发性CD28单抗联合CD3单抗活化前后FOXP3以及Fas∕FasL的表达。结果:腹水诱生法获得了CD28单克隆抗体3.8 mg∕ml。MTT实验结果表明,72h时,激发性CD28单抗联合抗CD3单抗,可较好促进T淋巴细胞(患者及对照组)的显著增殖。ELISA检测结果显示,CD3单抗联合激发型CD28单抗作用组中IL-2的分泌含量增高,IL-10的分泌含量降低。经免疫荧光及流式细胞术对肿瘤患者外周血T淋巴细胞中Treg细胞的特异性标志FOXP3蛋白进行检测,结果显示,肿瘤患者外周血中FOXP3蛋白表达比例为(6.208±2.754)%,对照组为(2.53±0.638)%,而活化后比例为(5.488±3.675)%。对照组为(2.173±1.137)%。同时T淋巴细胞表面的Fas?FasL的检测结果显示Fas的表达为(1.467±0.590)%,对照组为(1.122±0.598)%,活化后分别为(3.692±1.822)%、(3.6±0.657)%,而FasL表达二者分别为(2.89±1.027)%、(2.532±0.967)%,活化后FasL分别为(7.252±2.23)%、(7.96±2.938)%。结论:肿瘤患者外周血T淋巴细胞在CD3单抗联合CD28单抗作用下可有效活化增殖。且经体外活化后免疫力得到一定程度的恢复。Treg细胞的特异性标志FOXP3蛋白与疫缺陷呈明显的正相关。Fas/FasL的表达,一方面与肿瘤细胞免疫逃逸机制相关,另可能为FOXP3下调的原因。尚需进一步研究中和Treg的抑制作用在促进诱导效应T细胞反应方面的疗效。