琉璃苣籽油提取工艺及其抗氧化活性研究与产品开发

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琉璃苣籽油是一种富含γ-亚麻酸(γ-linolenicacid,GLA)类的小品种特种油,其不饱和脂肪酸高且脂肪酸组成特殊,并含有多种生理活性物质,具有防治心血管疾病、降低胆固醇和抑制癌症等多种生理保健功能。同时,琉璃苣籽油因具有抗氧化作用而广泛应用于功能性食品和医药等领域且潜力巨大,然而其抗氧化作用机制目前尚不明确。秀丽隐杆线虫(Caenorhabdits elegans)作为模式生物,其具有构造简单、生命周期短、基因全序列已知且信号通路高度保守等优点而被广泛用于生命科学领域。本研究优化了琉璃苣籽油索氏提取工艺,利用秀丽隐杆线虫探究琉璃苣籽油的抗氧化作用机理,并制备了琉璃苣籽油脂质体,主要研究结果如下:1、通过单因素和响应面试验优化得到琉璃苣籽油提取最佳工艺条件为提取时间4.16h,提取溶剂体积108.81mL,提取温度83.15℃,在此条件下琉璃苣籽油提取率达34.05%,提取的琉璃苣籽油中共鉴定出15种脂肪酸,其中9种不饱和脂肪酸含量达81.27%,GLA含量占20.96%。琉璃苣籽油酸值为3.04mgKOH/g,碘值150g/100g,皂化值200mgKOH/g,过氧化值 2.0g/100g,旋光率 1.4749g/mL。2、不同浓度琉璃苣籽油均能显著延长野生型秀丽隐杆线虫的寿命,增加运动行为次数和子代数。其中,1%琉璃苣籽油组野生型秀丽隐杆线虫体内荧光表达量明显减少,表明琉璃苣籽油最适抗氧化作用浓度为1%。相较对照组,野生型秀丽隐杆线虫经1%琉璃苣籽油处理后,其运动行为频率和产卵量增加,线虫体内活性氧自由基的滞留量减少,但其生存率、运动行为次数和子代数目低于0.1%GLA处理组。3、1%琉璃苣籽油处理的daf-2突变体线虫较野生型线虫和对照组daf-2突变体线虫吞咽和排泄频率显著增加,热应激存活率和存活时间显著增加,且不影响身体弯曲。1%琉璃苣籽油对daf-2突变体线虫抗氧化作用较野生型线虫和对照组daf-2突变体线虫显著。1%琉璃苣籽油处理的daf-16突变体线虫较野生型线虫的生存率降低且显著缩短其寿命,而1%琉璃苣籽油处理的daf-16突变体线虫较对照组daf-16突变体线虫的身体弯曲频率显著增加,应激存活率和存活时间降低,但对其头部摆动频率、吞咽频率和排泄频率不影响。同时,利用逆转录及实时定量聚合酶链式反应测得1%琉璃苣籽油处理的野生型线虫的daf-2基因的表达量较对照组显著升高。说明1%琉璃苣籽油通过上调daf2基因实现抗氧化作用。4、研究乙醇注入法、薄膜分散法、乙醇注入-超声法和薄膜分散-超声法四种方法制备琉璃苣籽油脂质体,其中乙醇注入超声法制备的脂质体包封率(99.99%)显著高于其余方法,且该法制得的脂质体形态较均一。利用乙醇注入-超声法制得的琉璃苣籽油脂质体在贮藏28d内脂质体形态稳定,包封率无显著变化(p>0.05),贮藏率随着时间的延长显著升高(p<0.05)。
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