【摘 要】
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目的:构建结核分枝杆菌重组卡介苗,研究其免疫原性及抗结核作用,以期获得结核病预防性和治疗性疫苗。 方法:通过基因工程重组技术将结核分枝杆菌保护性抗原ESAT6、MPT64、
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目的:构建结核分枝杆菌重组卡介苗,研究其免疫原性及抗结核作用,以期获得结核病预防性和治疗性疫苗。 方法:通过基因工程重组技术将结核分枝杆菌保护性抗原ESAT6、MPT64、Ag85A、Ag85B的编码基因分别与穿梭质粒载体PMD31、pYUB295重组,通过电穿孔技术导入卡介苗中,应用PCR扩增、PAGE电泳鉴定重组卡介苗。将重组卡介苗免疫小鼠后,通过ELISA法检测其血清中特异性抗体,用MTS法分析其脾淋巴细胞增殖指数;结核分枝杆菌攻击后,通过小鼠半数死亡时间、一定时间内的死亡率、肺、肝、脾细菌生长最低稀释度等指标评价各重组卡介苗对结核分枝杆菌感染的预防作用和治疗效果。 结果:通过PCR扩增获得esat6、mpt64、ag85a、ag85b基因,与穿梭表达载体PMD31、pYUB295重组后,通过PCR扩增、限制性内切酶酶切、DNA测序鉴定表明成功地构建了esat6、mpt64、ag85a、ag85b基因PMD31、pYUB295重组质粒。 将各重组质粒通过电穿孔导入卡介苗。质粒PMD31重组卡介苗在抗性培养上不能很好生长,质粒pYUB295重组卡介苗在抗性培养基上生长良好。pYUB295-目的基因重组卡介苗基因组DNA的PCR扩增以
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