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目的:糖尿病和牙周病是两种相互作用、互相影响的常见慢性疾病，我们前期研究结果表明糖尿病的糖基化终末产物(advanced glycation end products，AGEs)可以抑制人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells，HPDLSCs)的增殖与分化;而Wnt信号通路在干细胞的增殖和分化中也发挥着重要的作用，但两者是否在人牙周膜干细胞中存在联系，尚不清楚。本研究旨在对糖基化终末产物及WNT通路相关重组蛋白共同作用于人牙周膜干细胞后wnt经典通路的变化以及糖基化终末产物受体的变化进行探索。
方法:本实验主要采用体外组织块酶消化法获得健康人牙周膜细胞，再用单克隆法提取并纯化，培养至第三代进行实验研究.流式细胞仪对纯化后的牙周膜干细胞进行表型分子鉴定，将细胞随机分成健康组（H-PDLSCs组）和10ug/ml AGEs刺激组（A-PDLSCs组），两组细胞在成骨矿化诱导之后分别再加入DKK-1(100ng/ml)，Wnt3a(100ng/ml)，一周后碱性磷酸酶染色检测ALP活性;实时定量聚合酶链反应(Real Time Polymerase Chain Reaction，RT-PCR)检测成骨基因ALP、Runx2， wnt经典通路的标志物β-catenin以及糖基化终末产物受体RAGE在基因水平的表达;Western Blot进一步检测总蛋白ALP、Runx2、RAGE以及核蛋白中β-catenin在蛋白水平的表达;
结果:1、本实验采用体外组织块联合酶消化法培养原代细胞，7-9天可见组织块周围有贴壁细胞，细胞大多呈梭形，包体小，包浆较丰满，有极少数椭圆形的细胞存在，21天长至孔板底面积的80％.
2、流式细胞仪进行细胞表面分子鉴定:纯化后的牙周膜干细胞表面分子CD29、CD90、CD146、STRO-1呈阳性表达，阳性率分别为99.9％,98.2％，51.1％，6.6％。
3、成骨诱导后碱性磷酸酶染色:成骨矿化诱导七天后，碱性磷酸酶染色结果显示，H-PDLSCs组较A-PDLSCs组深，加入DKK-1之后，H-PDLSCs颜色最深，加入wnt3a之后，A-HPDLSCs组颜色最浅。ALP定量结果显示，差异有统计学意义(p＜0.05)。
4、牙周膜干细胞成骨诱导7天后，相关基因的表达差异:
1.wnt经典通路标志物β-catenin比较:成骨诱导7天后，RT-PCR检测结果显示H-PDLSCs表达明显低于A-PDLSCs组(p＜0.05)，差异有统计学意义;加入DKK-1之后，H-PDLSCs组的表达也低于A-PDLSCs组(p＜0.01)，差异显著;加入wnt3a后，H-PDLSCs组与A-PDLSCs组未见明显差异，无统计学意义。Western blot检测结果与RT-PCR一致。差异有统计学意义(p＜0.05)
2.成骨基因Runx2、ALP表达:成骨诱导7天之后，RT-PCR检测结果显示H-PDLSCs组明显高于A-PDLSCs组的表达，加入DKK-1之后，H-PDLSCs组的表达高于A-PDLSCs组，当加入wnt3a后，H-PDLSCs组的表达高于A-PDLSCs组(p＜0.05)。Western blot检测结果与RT-PCR趋势一致。并且与碱性磷酸酶ALP染色结果趋势相符。差异有统计学意义(p＜0.05)。
3.糖基化终末产物受体RAGE的表达比较:成骨诱导7天后，RT-PCR检测结果显示:H-PDLSCs组明显低于A-PDLSCs组(p＜0.05);加入DKK-1/wnt3a后，A-PDLSCs组表达仍高于H-PDLSCs(p＜0.05)。但H-PDLSCs/A-PDLSCs组加入DKK-1或wnt3a，与未加刺激H-PDLSCs/A-PDLSCs相比，差异不明显，无统计学意义;Western blot检测结果与RT-PCR检测结果趋势一致，差异都具有统计学意义(p＜0.05)。
结论::根据实验结果可以得出:成骨诱导条件下，AGEs刺激人牙周膜干细胞后，可以使其糖基化终末产物受体的表达增加;同时激活wnt经典通路，导致PDLSCs骨向分化受到抑制;DKK-1抑制wnt经典通路，可以促进PDLSCs成骨分化，当AGEs与wnt通路抑制剂DKK-1同时刺激牙周膜干细胞时，可以削弱DKK-1对wnt经典通路的抑制，同时也可以减弱DKK-1对PDLSCs成骨能力的促进;wnt3a激活wnit经典通路，抑制成骨，当AGEs与wnt通路激活剂wnt3a共同作用于PDLSCs时，β-catenin表达增高，协同wnt3a激活wnt经典通路，导致PDLSCs成骨能力明显下降;但wnt通路的激活剂或抑制剂对RAGE无明显影响，说明wnt通路可能在AGE-RAGE下游;因此我们推测AGEs可能通过激活RAGE的表达，进而激活wnt经典通路来抑制牙周膜干细胞的成骨分化。