论文部分内容阅读
心血管疾病与骨质疏松症正威胁着人类的生命健康,尤其给老年人的生活带来严重影响。目前治疗两种疾病的有效药物分别是降钙素基因相关肽(hαCGRP)和鲑鱼降钙素(sCT),但目前临床用hαCGRP与sCT主要是通过组织提取或化学合成的方法获得,存在来源有限和价格昂贵等问题。本课题为了满足同时预防和治疗心血管疾病与骨质疏松症的要求,应用基因工程技术对重组鲑鱼降钙素与降钙素基因相关肽(msCT-hαCGRP)融合基因进行了研究,并已成功将msCT-hαCGRP融合基因整合到植物双元表达载体中。研究拟利用生菜作为表达系统来表达该融合基因。选择美国大速生生菜品种,通过对再生体系的优化,获得最优再生条件:8%次氯酸钠对种子消毒灭菌30 min,播种于1/2 MS无菌培养基,取苗天数7 d,子叶柄为受体材料,正面朝上接入不定芽分化培养基。利用本实验室构建的重组基因工程菌株pBI AMV/hαCGRP/msCT EHA105,通过对遗传转化体系的优化,获得最佳转化条件:筛选分化培养基中Cefx浓度500 mg/L,Kan浓度25 mg/L,转化过程预培养2 d,菌液浓度OD600值0.1,侵染时间5 min。选择10株转基因抗性生菜进行扩大繁殖,对后代植株提取基因组DNA进行PCR检测,发现有8株表现为阳性,转基因阳性率为80%。选择一株阳性植株提取融合基因进行DNA序列测定,结果表明已成功将msCT-hαCGRP融合基因导入生菜基因组中,获得了具有保健和药用功能的生菜新品种。最终期望通过直接食用或提取融合表达产物来达到预防和治疗心血管疾病与骨质疏松症的目的。