米曲霉是我国传统酿造酱、酱油和酒类的生产菌种,已有一千多年的安全应用历史,是GRAS级别的安全菌株,也是较理想的异源蛋白表达宿主。虽然米曲霉的基因组测序于2005完成,但有很多重要功能基因还有待于进一步的诠释和挖掘,酰基辅酶A结合蛋白基因(acbp)就是需要研究的重要基因之一。本文为了克隆鉴定米曲霉菌株中acbp基因并研究酰基辅酶A结合蛋白(acy-CoA-binding protein,ACBP)的功能性质,本课题开展了以下几方面工作:1)提取米曲霉菌株的总RNA,反转录合成acbp cDNA,构建大肠杆菌原核表达载体(PMAL-c4x-acbp),实现重组ACBP在大肠杆菌Rosetta(DE3)细胞表达并使用MBP亲和层析柱纯化重组的米曲霉酰基辅酶A结合蛋白(MBP-AoACBP),SDS-PAGE结果显示MBP-AoACBP的分子质量大小约82 kDa;2)微量热涌动实验结果显示ACBP对长链酰基辅酶A具有很高的亲和性,其中对C20:0酰基辅酶A的亲和性(Kd=23 nM)最强,以上结果表明克隆的acbp基因在米曲霉中参与长链酰基辅酶A的转运。因长链酰基辅酶A是脂肪代谢的重要中间产物,暗示米曲霉ACBP参与调控脂类代谢;3)紫外诱变筛选出一株米曲霉尿嘧啶营养缺陷型作为表达宿主,将acbp基因连入改良的ANEp8-1载体中,构建了过表达载体(ANEp8-acbp);4)利用qRT-PCR和Western blot考察了米曲霉3.042在不同生长时间ACBP表达水平的变化,结果表明米曲霉在24-72 h之间acbp基因转录水平没有显著差异,而Western blot实验结果显示米曲霉在60 h左右ACBP的表达量明显增加。以上研究结果为米曲霉ACBP的功能研究及其应用奠定了基础。