微生物法催化7-ACA的脱乙酰基研究

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D-7-ACA是合成或半合成头孢类抗生素的一种重要中间体,以前主要是采用化学法水解7-ACA生成,由于化学法的种种缺点,酶法水解7-ACA生产D-7-ACA由于其独特的优点逐渐受到广泛关注。本论文成功地从土壤中筛选到一株产头孢菌素C去乙酰基酶的微生物,并对其催化特性,固定化,培养条件进行了研究。本论文以7-ACA为唯一碳源通过富集培养从土壤中筛选到了一株具有CAH(Cephalosporin-C deacetylase,头孢菌素C去乙酰基酶)活性的微生物。对它的菌体形状和菌落形态进行了观察,对照文献,初步确定为粘红酵母,命名为Rhodotorula glutinisLHS3072。该株菌的一个重要优点是能够直接使用静息细胞进行催化实验,避免了酶的提取纯化步骤。对Rhodotorula glutinis LHS3072的细胞CAH酶学特性进行了研究。确定了酶的最优pH,温度,热稳定性,pH稳定性,底物浓度,缓冲液体系。得到了最佳催化反应体系:菌体湿重30%,pH 7.0,温度25℃下可以在3h内完全催化15%的7-ACA。对Rhodotorula glutinis LHS3072进行了细胞固定化研究,通过单因素法确定了聚丙烯酰胺包埋法的固定化条件:凝胶总浓度12%,交联度6%,菌体浓度30g/L。静息细胞经固定化之后酶活残留为60%。并对固定化细胞的酶学特性进行了研究,固定化细胞的pH耐受性和在高温时的稳定性均比自由静息细胞得到了提高。固定化细胞的重复利用性也比静息细胞显著提高,固定化细胞在循环使用50次之后仍具有79.7%的活力残留,而自由细胞使用7次后活力就降低到初始活力的79.4%。最后对Rhodotorula glutinis LHS3072的发酵培养产酶条件进行了优化,降低了培养成本,使其具有潜力应用于工业化生产。培养条件为:葡萄糖30g/L,一品鲜酵母粉20g/L,KH2PO45g/L, pH7.0。
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