枸杞提取物对人视网膜色素上皮细胞的保护作用

来源 :兰州大学 | 被引量 : 5次 | 上传用户:xingyunfei520
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目的:人视网膜色素上皮(RPE)细胞是调节和维持人体眼部视网膜健康和稳态的重要部分。氧化应激对人视网膜色素上皮细胞的氧化损伤已被证明是参与年龄相关性黄斑变性(AMD)眼部疾病发生和发展的一个重要因素。人视网膜病变导致的年龄相关性黄斑变性在全世界范围内是造成老年人群视力减弱甚至失明的主要原因之一。枸杞,一种茄科类植物,已被证明其具有特别显著的抗氧化的生物学活性。在人视网膜色素上皮细胞中,H2O2造成的氧化损伤可诱导细胞凋亡和炎症因子分泌上调,本研究的目的在于探讨枸杞提取物枸杞多糖和类胡萝卜素是否具有保护作用。方法:1)用不同浓度的H2O2(200μmol/L、300μmol/L、500μmol/L、800μmol/L)筛选半数致死浓度构建氧化损伤模型;2)用磺基罗丹明B(SRB)法检测枸杞提取物枸杞多糖和类胡萝卜素对ARPE-19细胞的毒性,选取最佳的实验处理浓度以及枸杞多糖和类胡萝卜素对H2O2导致的细胞增殖率下降的影响;3)用CCK-8法检测类胡萝卜素对H2O2诱导的细胞存活率的影响;4)用流式细胞术法检测枸杞多糖和类胡萝卜素对H2O2诱导的细胞凋亡的发生率的影响作用;5)用MDA试剂盒检测MDA含量的变化;6)应用DCFH-DA荧光探针和流式细胞术法检测细胞内ROS的释放水平;7)利用ELISA试剂盒检测细胞因子TNF-α和IL-1α的分泌情况。结果:1)实验结果显示当H2O2的处理浓度为300μmol/L时人视网膜色素上皮细胞的存活率约等于50%,所以选此浓度为最佳浓度建立氧化损伤模型;2)当枸杞提取物枸杞多糖和类胡萝卜素的浓度在10-5-10-22 mg/mL范围内时细胞增殖率与对照组的未处理细胞相比没有统计学差异,当枸杞提取物枸杞多糖和类胡萝卜素的浓度10-11 mg/m L时细胞增殖率与对照组的未处理细胞相比存在统计学差异。3)CCK-8检测发现加入类胡萝卜素之后细胞的存活率与H2O2处理的对照组相比呈上升趋势;4)流式细胞术的检测结果表明,枸杞提取物枸杞多糖和类胡萝卜素预处理组细胞30 min后加入300μmol/L H2O2,结果显示细胞凋亡率明显低于只用300μmol/L H2O2处理组;5)MDA检测结果表明H2O2氧化损伤处理组MDA的含量相比正常对照组呈上升趋势,枸杞提取物枸杞多糖和类胡萝卜素处理组MDA的含量降低;6)流式细胞术检测活性氧的结果显示枸杞多糖和类胡萝卜素降低了ROS的释放水平;7)ELISA检测结果显示枸杞多糖和类胡萝卜素抑制了TNF-α和IL-1α的分泌。结论:枸杞提取物枸杞多糖和类胡萝卜素对H2O2和ROS诱导的氧化损伤与炎症反应具有保护作用。本研究提示枸杞提取物枸杞多糖和类胡萝卜素可通过保护人视网膜色素上皮细胞,达到明目的作用。
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