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目的：研究多器官功能障碍综合征（multiple organs dysfunction syndrome，MODS）病程中脾脏树突状细胞（dendritic cells，DC）的变化及MHC-Ⅱ蛋白的泛素依赖性作用，证实泛素-蛋白酶体途径在MODS病程中对脾脏DC MHC-Ⅱ变化及DC功能的影响，探讨E3泛素连接酶MARCH1在MODS第一次打击期对脾脏DC MHC-Ⅱ泛素化调节的作用机制，并观察干预MARCH1对MODS第一次打击期脾脏DC免疫功能的影响，进而为MODS的免疫调节与防治寻找新的靶点。方法：采用腹腔注射酵母多糖复制MODS小鼠模型。120只小鼠随机分为正常对照组和MODS1d、3d、5d、7d和10d组。各组实验小鼠分别分离脾脏和胸腺组织，一部分脾脏应用免疫荧光方法检测CD11c+DC数量的变化，剩余组织应用MiniMACS免疫磁珠分别分离DC和T细胞用于体外细胞学实验。运用流式细胞术、Real-Time PCR、Western Blot和MTT法等检测DC对CD86、MHC-Ⅱ、泛素、E3泛素连接酶（MARCH1-8）的表达，DC分泌IL-12、TNF-α的水平以及诱导T细胞增殖和分泌IL-2、IFN-γ的水平。接着运用免疫共沉淀及WesternBlot检测正常对照组和MODS1d组DC MHC-Ⅱ蛋白泛素化水平，并用MG132分别处理两组DC各6h，运用PI染色法、Real-Time PCR、Western Blot和MTT法等检测处理前后各组DC的凋亡率，DC对MHC-Ⅱ蛋白的表达以及诱导T细胞增殖和分泌IL-2、IFN-γ、TNF-α的水平。通过从小鼠尾部提取cDNA作为模板，采用特异的引物，运用聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）技术扩增出MARCH1cDNA片段，EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切后，连接于载体pMB-HA质粒上，构建pMB-HA-MARCH1重组载体，经双酶切和DNA测序分析检测重组载体构建结果，转化大肠埃希菌DH5α感受态菌、筛选阳性克隆、抽提质粒并进行纯化。将pMB-HA-MARCH1表达载体和SiRNA分别转染进MODS1d组DC，运用MTT法、PI染色法、流式细胞术、Real-Time PCR、免疫共沉淀及Western Blot等比较MODS1d组、MARCH1siRNA敲低组和MARCH1过表达组DC的形态、活力和凋亡率，DC对MHC-Ⅱ蛋白的表达和泛素化水平以及诱导T细胞增殖和分泌IL-2、IFN-γ、TNF-α的水平。结果：MODS病程中CD11c+DC数量逐渐减少，DC表面MHC-Ⅱ和CD86蛋白，DC分泌的IL-12、TNF-α和其介导的T细胞增殖活性以及T细胞分泌的IL-2和IFN-γ的表达均为先升高，在MODS1d组达到峰值，此后下降，至MODS期降到最低点，但MHC-Ⅱ和泛素的mRNA水平变化均不明显。而E3泛素连接酶中MARCH1的变化最显著，mRNA和蛋白水平表达均为先下降，在MODS1d组达到最低值，后略有升高趋势，直至MODS10d组又有所下降。在MODS病程中MHC-Ⅱ与MARCH1的变化趋势大致相反。MODS1d组脾脏DC MHC-Ⅱ蛋白泛素化程度较正常对照组显著降低，MG132处理前后两组DC凋亡率无明显变化，而DC MHC-Ⅱ蛋白的表达以及诱导T细胞增殖和分泌IL-2、IFN-γ、TNF-α的水平均为MODS1d组与MG132处理后的正常对照组比正常对照组高，其中前者比后者稍高，MG132处理后的MODS1d组为最高。成功构建了E3泛素连接酶MARCH1的真核表达载体pMB-HA-MARCH1，并合成了3条效果比较理想的MARCH1的siRNA。对MODS1d组DC进行MARCH1过表达和siRNA敲低干预，发现三组DC的形态、活力和凋亡率均无明显变化，而MARCH1过表达干预可以增加MHC-Ⅱ的泛素化程度，减少MHC-Ⅱ的蛋白表达水平，并降低DC诱导T细胞增殖和分泌IL-2、IFN-γ、TNF-α的功能；而MARCH1siRNA敲低干预则相反可以降低MHC-Ⅱ的泛素化程度，增加MHC-Ⅱ的蛋白表达水平，并增强DC诱导T细胞增殖和分泌IL-2、IFN-γ、TNF-α的功能。结论：1、在MODS第一次打击期DC的数量虽有下降，但其抗原提呈功能与激活T细胞介导免疫应答反应的能力却是增强的；而到了MODS期，DC的数量及功能均降至最低，机体处于免疫抑制状态。2、在MODS病程中，是MARCH1通过泛素化降解MHC-Ⅱ减少了小鼠脾脏DC MHC-Ⅱ的表达。3、在MODS中脾脏DC MHC-Ⅱ的变化确实是具有泛素依赖性。4、成功构建了E3泛素连接酶MARCH1的真核表达载体pMB-HA-MARCH1，并合成了3条效果较理想的MARCH1的siRNA。5、在MODS病程第一次打击期，脾脏DC MHC-Ⅱ过表达的原因与MARCH1对MHC-Ⅱ的泛素化降解程度较低有关。提示病程初期用MARCH1过表达干预，可以作为防止MODS免疫机能过亢和炎症反应过度的一个潜在的治疗靶点。