苹果是一种普遍栽培的多年生的木本植物。各种环境因子胁迫影响苹果产业,造成苹果产量降低。因此目前苹果育种的一个主要目标是培育含有综合优良抗性的品种。本研究前期通过转录组测序分析发现与普通二倍体苹果相比具有较好综合抗胁迫能力的同源四倍体材料中可能与抗逆有关的MdWRKY33基因的表达水平明显上调,因此本实验首次在‘寒富’苹果中分离克隆MdWRKY33基因全长,分别构建过表达载体及沉默载体利用农杆菌介导法转化苹果‘GL-3’,获得转基因植株,通过胁迫处理评价MdWRKY33基因的功能,为苹果的抗性育种研究提供参考。本实验的主要研究结果如下:1.首次在‘寒富’苹果中克隆获得了Md WRKY33基因的CDS序列,全长为1716 bp。含有两个WRKYGQK结构域以及C₂H₂型锌指结构,属于第Ⅰ类WRKY转录因子。其氨基酸序列与蔷薇科中白梨的同源相似度极高。2.对MdWRKY33基因进行亚细胞定位,结果显示其定位在细胞核中。3.分别构建苹果Md WRKY33基因的过表达载体及沉默载体。利用农杆菌介导法转化苹果‘GL-3’,分别获得5个过表达株系和3个沉默株系。4.用NaCl和SA分别对过表达和沉默植株进行胁迫处理,发现MdWRKY33的过表达植株相对于沉默和对照植株均表现出较强的抗性,说明MdWRKY33基因的表达具有抗盐胁迫功能及在SA模拟的逆境条件下,过表达MdWRKY33植株的抗性增强。5.对过表达植株和沉默植株接种斑点落叶病菌,发现过表达MdWRKY33的植株相对于对照植株发病较轻,而沉默植株相对于对照植株发病严重,说明MdWRKY33基因的表达具有显著抗病的功能。