蜡样芽孢杆菌是食品常见的致病菌,由其引起的食物中毒通常会出现两种临床症状——呕吐和腹泻。呕吐与热稳定的呕吐毒素有关,而腹泻则是由于部分菌株产生了多种肠毒素。与肠毒素不同,呕吐毒素具有较强的耐受性(耐酸、耐热、耐蛋白酶酶解),由产呕吐毒素的蜡样芽孢杆菌产生。有研究表明,当食物中仅存在10~3 CFU/g产呕吐毒素蜡样芽孢杆菌时,就可引起人呕吐,甚至死亡。因此,应建立快速简便的蜡样芽孢杆菌检测方法,以有效避免和控制因食用被该菌污染的食物而引起中毒事件的发生。DNA发夹结构自组装反应是指无需酶催化,DNA链即可在吉布斯自由能或位形熵的推动下自行组装,实现信号级联放大的杂交反应。该方法因操作简便、选择性多、反应稳定而在现代分析领域中被广泛关注。本研究为了缩短检测时间,进一步提高灵敏度,建立了基于DNA发夹结构自组装信号放大方法,并结合流式微球技术、氧化石墨烯荧光传感器用于检测牛奶加标样中产呕吐毒素的蜡样芽孢杆菌。各章内容分述如下:第一章综述了DNA发夹结构自组装信号放大策略应用的研究进展。第二章首先建立了基于杂交链式反应(HCR)-流式微球分析技术用于检测产呕吐毒素蜡样芽孢杆菌的方法,以生物素修饰的探针作为磁性微球和HCR产物的“桥梁”,以磁珠表面的荧光作为信号输出,通过测定磁珠表面的荧光信号来定量检测产呕吐毒素蜡样芽孢杆菌。采用琼脂糖凝胶电泳及倒置荧光显微镜来验证所建立的方法可行性,且优化了生物素化探针的用量,荧光素(FAM)标记发夹探针H1/H2的浓度以及HCR反应时间,并对该方法的灵敏度、特异性进行了研究。基于最适的反应条件,该方法在纯培养液中的检测限为7.6×10~0CFU/mL;牛奶加标样中的检测限为9.2×10~2 CFU/mL。第三章建立了基于催化发夹型DNA自组装反应(CHA)-氧化石墨烯荧光传感器检测产呕吐毒素蜡样芽孢杆菌的方法,通过PCR对产呕吐毒素的蜡样芽孢杆菌中的DNA进行扩增,并通过加热变性得到目的单链,通过目的单链引发CHA反应产生双链体,从而远离GO表面来恢复其荧光。基于最适的反应条件,该方法在纯培养液中的检测限为6.2×10~1 CFU/mL;牛奶加标样中的检测限为5.9×10~2 CFU/m L。