论文部分内容阅读
目的急性心肌梗死后移植干细胞的治疗作用已得到广泛认同，但细胞移植尚存在诸多问题，比如扩增周期长、免疫排斥、存活率低、归巢量少、不能与宿主细胞通讯等限制了细胞移植治疗的应用。而心脏自身的固有干细胞（CSC）的特性已在多项研究中得到证实，若能寻找一种能够原位激活或募集CSCs的药物或因子，可能是一种干细胞治疗心肌梗死的新途径。降钙素基因相关肽（CGRP）广泛分布于血管系统，多项研究证实其对间充质干细胞、内皮细胞等具促增殖和迁移作用，并且能上调体内bFGF、IGF-1、HGF等能调控CSC生物学作用的生长因子。因此，我们设想：CGRP对CSCs是否有类似作用，其心血管保护作用是否与CSC有一定关联呢？为了回答这一问题，本实验拟在大鼠体内实验中，直接给予CGRP处理，观察其对CSC是否具有募集作用，并初步探讨其募集CSC的机制和对急性心肌梗死的治疗作用。方法通过结扎左前降支建立大鼠急性心肌梗死模型。将104只健康SD大鼠随机分为假手术组、对照组、CGRP组。假手术组仅开胸，不结扎前降支，对照组在梗死后给予PBS心肌内注射，CGRP组在梗死后按10μg/㎏心肌内注射CGRP。各组于3d、7d、14d、28d处死动物，每个时间点保证每组6只。取得标本后，分别作HE、Masson染色、TTC染色观察心脏形态学改变；超声心动图检测心功能；免疫组织化学观察心肌内血管新生；采用ELISA法检测心肌组织内VEGF水平；免疫荧光染色观察CSC募集情况。结果1.术后4周HE染色显示假手术组心肌排列整齐有序，无瘢痕组织；对照组大量心肌消失，较多纤维瘢痕组织增生，排列紊乱；CGRP组瘢痕组织明显比对照组少，有较多正常心肌细胞存留。Masson染色显示，假手术组心肌细胞呈红色，未见蓝染之胶原纤维；对照组可见大量蓝色胶原纤维，胶原纤维内细胞核溶解消失，存活心肌细胞少；CGRP组胶原纤维较对照组明显减少。2.术后4周各组行超声心动图检测LVDd、LVDs、FS和EF值。结果显示，与假手术组相比，对照组及CGRP组的LVDd和LVDs均增大，FS和EF减低；给予CGRP组较对照组以上心功能指标明显改善（P<0.05）。3. TTC染色显示，假手术组未见梗死区，而对照组梗死面积较大，为（31.72±4.00）%；与对照组相比，CGRP组梗死面积明显缩小，为（22.54±1.73）%（P<0.05）。4.免疫组织化学染色计数各组新生微血管结果提示，心肌梗死后梗死周围区毛细血管较假手术组增加（P<0.01），而CGRP较对照组增加更明显（P<0.01）.5. ELISA法检测心肌组织VEGF水平，对照组和CGRP组较假手术组于3天即明显升高，7天达高峰，14天下降，28天时降至假手术组水平。其中在3、7、14天，CGRP组VEGF水平较对照组明显增加（P<0.05）6.免疫荧光染色检测CSC募集情况，结果提示，对照组和CGRP组CSC细胞数在第3天即增加，7天达高峰，14天明显减少。其中，各时间点中对照组较假手术组CSC细胞数明显增多（P<0.05），CGRP组较对照组则增加更明显（P<0.05）。结论1. CGRP可诱导心肌VEGF高表达，促进血管生成，减少梗死面积，改善左室重构和心功能，对急性心肌梗死具有治疗作用。2. CGRP可促进急性心肌梗死后CSCs在梗死区域募集，并在第7天达高峰,其机制可能与VEGF有关。