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抗坏血酸(Ascorbic Acid,AsA)即维生素C(Vitamin C,Vc),是生物体内重要的抗氧化剂和辅酶因子,在植物代谢和抵抗非生物胁迫中起重要作用。茶树作为一种重要的经济作物,AsA含量丰富,但目前对于其合成及调控机理的研究甚少。因此,本研究在课题组前期研究的基础上,以茶树叶片作为材料,克隆和鉴定了茶树AsA代谢途径中的两个关键酶基因,通过荧光定量PCR分析了茶树中与AsA代谢相关的9个基因的表达情况,并初步探究了茶树中这9个基因在干旱和盐胁迫下的响应机制。获得的主要结果如下:1.从茶树叶片中克隆了L-半乳糖途径合成AsA的关键酶基因L-1,4-半乳糖内酯脱氢酶(L-galctono-1,4-lactone dehydrogenase,GLDH)基因以及AsA再生酶基因脱氢抗坏血酸还原酶(Dehydroascorbate reductase,DHAR)基因的cDNA全长。其中GLDH基因cDNA全长2052 bp,含有1830 bp的完整阅读框,编码610个氨基酸,NCBI登陆号为KF619448.1。DHAR基因cDNA全长950 bp,含636 bp完整的开放阅读框,编码212个氨基酸,NCBI登陆号为KF612020.1。2.构建了GDP-L-半乳糖磷酸酶(GDP-L-galactose phosphowlase,GGP)基因、L-半乳糖-1-磷酸酶(L-galactose-1-phosphatase,GPP)基因以及GLDH和DHAR基因的原核表达载体并在HI-Control BL21(DE3)细胞中实现高效表达,经IPTG诱导后分别产生约66kDa、45 kDa、90 kDa、40 kDa的融合蛋白,与蛋白分子量的预测值相一致。3.在茶树新梢中,芽下三叶的AsA含量最高,而总AsA在芽和芽下三叶中含量都比较高,与AsA生物合成相关的基因在具有一定成熟度的叶片中表达量较高,而与AsA再生途径相关的基因在芽中具有较高的表达量。不同品种AsA含量以及AsA合成和再生酶基因的表达量也不同,但未发现某个基因的表达与AsA含量呈显著相关性。4.在PEG6000模拟干旱胁迫中,水培茶苗芽下一叶中AsA和总As A含量在短期(0~2 h)内有显著增加,但各AsA代谢相关酶基因表达量变化规律性并不强。5.高浓度NaCl胁迫下,除了GPP和GDH基因在处理初期(1 h或2 h内)表达量略有下降外,合成酶基因表达量基本上均呈现先升后降的趋势。提高盐胁迫浓度,达到峰值的时间也会推迟。高盐处理(500 mmol·L-1 NaCl)的同时,在培养液中添加4 mmol·L-1AsA,能更大程度地促进各基因的表达。