流感病毒(H5N1)Vero细胞适应株制备

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H5N1禽流感在全球各地爆发以来,到2007年底,WHO已经证实感染禽流感致死的人数超过200人,致死率高于50%。WHO的专家预测禽流感病毒在人体的逐步适应很可能引起一场全球性的流感大爆发,推荐各国开发生产H5N1人用流感疫苗。目前H5N1人用流感疫苗主要是用鸡胚为培养基质开发生产,H5N1禽流感爆发时难于在短期内提供足够的鸡胚生产疫苗,另外,鸡胚中可能带有的外源性因子也影响疫苗的质量。Vero细胞是WHO推荐用于生产疫苗的细胞,能够利用生物反应器进行大规模培养。与鸡胚来源的疫苗比较,在Vero细胞上得到的流感疫苗可以产生较强的体液免疫反应和细胞免疫反应。如果研究出一种用Vero细胞培养的H5N1禽流感疫苗毒株,将能较好的解决现在禽流感疫苗生产存在的一些问题,对防治禽流感有重大意义。该实验选用H5N1禽流感疫苗株与本实验室筛选的H3N2 Vero适应株同时接种鸡胚,24小时后取尿囊液,加入H3N2 Vero细胞适应株的抗血清中和后在Vero细胞上传代,获得H5N1 Vero细胞高产适应株,利用空斑实验纯化毒株。连续传代20代后,应用血凝抑制实验与基因测序鉴定该毒株,并进一步测定该H5N1 Vero细胞适应株的致病性、免疫原性等生物学特性。获得的H5N1 Vero细胞适应株可用于H5N1禽流感人用疫苗的开发。
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