2017年广西IBDV的分离鉴定及其基因和血清型分析

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鸡传染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)属于双RNA病毒科、禽双RNA病毒属,其基因组由A、B两个节段组成,血清型分为I型和II型。该病毒可引起鸡急性、高度接触性的疾病即传染性法氏囊病(infectious bursal disease,IBD)。该病主要侵害免疫器官,造成严重的免疫抑制,并继发感染细菌、支原体、病毒和寄生虫等多种病原,并可使疫苗免疫应答减弱甚至免疫失败。由于IBDV抗原变异性和血清亚型的多样性,给疾病的防控带来了困难。因此,实时了解和掌握IBDV的基因及抗原变化对于疾病的防控有着重要意义。本课题对广西玉林、南宁、北流、柳州等地2017年临床发生IBD的疑似病例采集其法氏囊组织,通过鸡胚绒毛尿囊膜途径(CAM)接种SPF鸡胚进行IBDV的分离鉴定,获得了 11株IBDV分离株。对这些分离株的A、B节段的vVP2和VPl-b分别进行扩增与序列测定,通过对分离毒株进行基于vVP2的关键氨基酸位点对比及遗传系统进化分析,发现分离株NN170502具有222P、279N、284T、294L和299N的特征,与弱毒参考株的特征性氨基酸位点一致;进化树分析结果显示,NN170502与Gt、Cu-1M等弱毒参考株在同一分支,亲缘关系较近,而与强毒参考株亲缘关系较远;YL170114等其他10株分离株具有与强毒参考株一致的222A、2561、284A、2941和299S氨基酸位点,遗传进化分析发现与HLJ-0504(vvIBDV)为一大分支。对11株分离株进行基于VP1-b的关键氨基酸位点分析,发现分离株LZ170322具有与弱毒参考株特征性氨基酸位点一致的242D、287T、290L和293E,遗传进化树也与弱毒参考株在同一分支;其余10株分离株的氨基酸位点分别为242D、287A、290M和293D,为与中国新型vvIBDV(代表毒株为HLJ-0504)一致,进化树也与HLJ-0504亲缘关系最近,核苷酸相似性高达97.8%-98.0%。这11株分离株均发生了基因节段重排现象,其中9株毒株的重排类型属于II型,即vVP2(位于A节段)来源于wIBDV、VP1-b(位于B节段)来源于HLJ0504-like;1株(LZ170322)重排类型属于I型,即vVP2来源于vvIBDV、VPl-b来源于attIBDV;1株(NN170502)重排类型属于IV型,即 vVP2 来源于 attIBDV、VP1-b 来源于 HLJ0504-like。本课题还用实验室制备的单因子血清与这11株分离病毒在CEF细胞上进行微量交叉中和试验,结果显示11株分离株与血清亚型1的四个参考株B87、040124、TSC-1和HUN0801之血清的中和效价最高,为102.34-104.72,且11株分离株与亚型1的这四个参考株血清的交叉中和滴度差异均在100.5以内,而与亚型2参考株JS7以及与亚型3参考株BH11的血清之交叉中和滴度差异大于100.5,可以判定11株分离株均属于IBDV血清I型之亚型1病毒。本课题的研究结果证明,2017年广西流行的染性法氏囊病病毒全部都是基因重排株,其中HLJ0504-like毒株占优势,而且血清型均属于血清Ⅰ型的亚型1。
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