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目的： 巨噬细胞浸润是糖尿病肾病发生发展的重要环节。巨噬细胞活化状态对糖尿病肾病的发展具有重要作用。巨噬细胞可以分化为经典活化巨噬细胞(M1)和非经典活化巨噬细胞(M2)两种活化表型。调节巨噬细胞活化状态是干预糖尿病肾病进展的潜在有效手段。糖尿病肾病的另一重要病理特征是肾小管上皮细胞间充质转分化(EMT)。近期发现，1，25-二羟维生素D3对糖尿病肾病有显著肾保护作用。我们通过体外研究首次探讨高糖对巨噬细胞分化的调节作用，以及这种作用对肾小管上皮细胞间充质转分化的影响，并进一步探索1，25-二羟维生素D3对巨噬细胞活化状态调节作用机制以及对EMT的抑制作用。 方法： 第一部分：采用高糖(右旋葡萄糖)浓度依赖性(20mM，30mM，35mM)以及时间依赖性(0h，6h，12h，24h，48h)刺激人巨噬细胞系(U937)。检测巨噬细胞活化表型标志物：酶活性法检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)(M1标志物)表达。RT-PCR法检测iNOSmRNA以及甘露糖受体(MRC，M2标志物)mRNA表达；ELISA法检测上清液中炎性细胞因子TNF-a、IL-12、IL-6(M1标志物)。 第二部分：高糖(30mM，12h)刺激U937，分离上述细胞后与人肾小管上皮细胞(HK-2)共培养24h。观察HK-2细胞形态学改变，运用RT-PCR及Western blot方法检测Fibronectin、a-SMA、E-Cadherin(EMT标志物)表达。 第三部分：1，25-二羟维生素D3(10nM)干预高糖(30mM，12h)预孵育U937。检测巨噬细胞活化表型标志物：免疫荧光法检测U937内Fibronectin(M2标志物)；RT-PCR检测iNOS和甘露糖受体(MRC)mRNA，ELISA法检测TNF-a、IL-12、IL-6。 第四部分：1，25-二羟维生素D3刺激高糖预孵育的小鼠巨噬细胞系(RAW264.7)。RT-PCR法检测iNOS(M1标志物)、MRC、IL-10、Arginase mRNA(M2标志物)；RT-PCR法检测VDR、PPARγ mRNA。 第五部分：1，25-二羟维生素D3干预高糖(30mM，12h)预孵育U937后，与HK-2共培养24h。观察HK-2细胞形态学改变，运用RT-PCR及Western blot法检测Fibronectin、a-SMA、E-Cadherin。 结果： 第一部分：高糖浓度依赖性刺激U937，各组中U937表达iNOS活性均增强(P<0.05)，iNOS活性呈浓度依赖性上升。其中，30mM高糖组刺激U937表达iNOS活性达最大值(48±6.6 U/mgprot，P<0.01)。高糖时间依赖性刺激U937，高糖组从0至12h产生iNOS活性随时间延长表达逐渐增加，呈时间依赖性(P<0.05)。高糖刺激U937达12h时iNOS活性达最大值(2.2±0.13倍vs对照组，44.6±10.7 U/mgprot)。在12h后，高糖组产生iNOS活性急剧下降，高糖组在24h至48h间产生的iNOS活性与对照组相比无明显差异(P>0.05)。iNOS活性在高糖组与IFNγ/LPS组(M1模型组)中，各个时间点间变化(0h至48h)均无明显差异(P>0.05)。高糖(30mM，12h)刺激iNOS mRNA表达增加(5.10E-05±1E-05，P<0.05)；MRC mRNA表达下降(P<0.05)。高糖(30mM，12h)刺激U937分泌IL-6、TNF-a、IL-12显著增加(645±57 pg/ml，P<0.05；495±25 pg/ml，P<0.05；481±63 pg/ml，P<0.05)。 第二部分：高糖干预U937细胞12h，分离U937后与HK-2细胞共培养24h后，HK-2细胞发生形态学改变，表现为成纤维细胞样外观，细胞拉长、肥大，由椭圆形贴壁生长变为长梭形，丧失鹅卵石样特征性形态。HK-2细胞表达Fibronectin、a-SMA蛋白水平增加(0.86±0.05，P<0.05；0.76±0.04，P<0.05)，同时Fibronectin及a-SMA mRNA表达亦显著增加(3.3E-02±3.5E-03，P<0.05；2.6E-05+2.1E-06，P<0.05)，E-Cadherin蛋白及mRNA表达降低(0.71±0.01，P<0.05；2.95E-04±1.14E-05，P<0.05)。 第三部分：1，25-二羟维生素D3(10nM)刺激高糖(30mM，12h)预孵育U937细胞48h。细胞内Fibronectin(红色荧光)表达增强；细胞内iNOS mRNA表达下降(P<0.05)，甘露糖受体(MRC)mRNA表达增加(P<0.05)；炎性细胞因子TNF-a、IL-6、IL-12表达下降(368±40 pg/ml，P<0.05；489±48 pg/ml，P<0.05；199±11 pg/ml，P<0.05)。 第四部分：1，25-二羟维生素D3(10nM)干预高糖(30mM，12h)预孵育小鼠巨噬细胞系(RAW264.7)48h，MRC、IL-10、Arginase mRNA表达增加(P<0.05)，而iNOS mRNA表达下降(P<0.05)；1，25-二羟维生素D3浓度依赖性(1nM，10nM，100nM，1000nM)干预高糖(30mM，12h)预孵育RAW264.7细胞，各组VDR mRNA表达均增加(P<0.05)，呈浓度依赖性上升，1000nM1，25-二羟维生素D3刺激RAW264.7细胞表达VDR mRNA达最大值(70.6±7.5倍vs对照组)。而各组(10nM，100nM，1000nM)中PPARγ mRNA表达均增加(P<0.05)，100nM1，25-二羟维生素D3刺激RAW264.7细胞表达PPARγmRNA达最大值(6.45±0.21倍vs对照组)。 第五部分：1，25-二羟维生素D3刺激高糖(30mM，12h)预孵育U937细胞48h后，分离提纯上述细胞与HK-2细胞共培养24h。HK-2细胞恢复鹅卵石样形态，仅少数发生形态变化。HK-2细胞表达Fibronectin及a-SMA蛋白下降(0.25±0.02，P<0.01；0.26±0.04，P<0.05)，E-Cadherin蛋白表达增加(0.77±0.05，P<0.05)；HK-2细胞表达a-SMA和Fibronectin mRNA(7.42E-04±4.9E-05，P<0.05；1.60E-01±0.01，P<0.05)下降，表达E-cadherin mRNA(3.85E-03±3.6E-04，P<0.05)上调。 结论： 高糖促进巨噬细胞经典活化；高糖诱导的巨噬细胞经典活化促进肾小管上皮细胞间充质转分化；1，25-二羟维生素D3逆转高糖诱导巨噬细胞经典活化，并促使巨噬细胞非经典转化，进而抑制其引起的肾小管上皮细胞间充质转分化；1，25-二羟维生素D3介导高糖诱导经典活化巨噬细胞向非经典活化巨噬细胞转化的细胞内信号传导机制可能与调节VDR-PPARγ Cross-talk有关。