【摘 要】
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目的:在大肠杆菌中表达人源性热休克蛋白70基因并制备热休克蛋白70-肿瘤多肽复合物(HSP70-Pcs)瘤苗,并进行体外试验,以探求治疗癌症治疗的新策略。方法:采用PCR方法扩增人HSP
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目的:在大肠杆菌中表达人源性热休克蛋白70基因并制备热休克蛋白70-肿瘤多肽复合物(HSP70-Pcs)瘤苗,并进行体外试验,以探求治疗癌症治疗的新策略。方法:采用PCR方法扩增人HSP70 cDNA,将PCR产物克隆到表达载体pET30a上,将重组质粒pET30a -HSP70转化大肠杆菌BL21上表达出hsp70蛋白并纯化。培养人结肠癌细胞LS 174 T并提取肿瘤混合多肽,在体外将HSP70和提取得到的肿瘤混合多肽交联形成HSP70-PCs,分别用HSP70-PCs、HSP70、肿瘤混合多肽负载人树突状细胞以及HSP70-PCs直接免疫人淋巴细胞,用MTT比色法检测各组人淋巴细胞在体外对人肠癌细胞LS 174 T的细胞毒效应。结果:1.基因工程成功获得HSP70,并且经纯化后的蛋白纯度达到90%以上。2.获得肿瘤混合多肽以及HSP70-PCs。3. HSP70-PCs-DC组的体外细胞杀伤活性明显高于其他四组,差别有显著性意义。(p<0.01)。HSP70-DC、PCs-DC、HSP70-PCs以及对照组杀伤率差别无显著性(p>0.05)。结论:1.HSP70-PCs瘤苗可产生特异性细胞免疫应答,为其用于癌症的治疗提供实验及基础。2.通过体外扩增获得HSP70的方法,解决了HSP70瘤苗在临床上的应用因HSP70来源问题而受到限制,为癌症的治疗开辟了一条新的治疗策略。
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