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目的:研究发现淫羊藿苷(icariin,ICA)能促进骨折后骨愈合,维持去卵巢大鼠骨量防止骨质疏松的发生。阐明ICA抗骨质疏松的分子机制,是合理利用ICA对抗骨质疏松的关键所在。本实验旨在观察ICA对前成骨细胞(MC3T3-E1细胞)增殖、分化等的影响,BMP和Wnt/β-catenin信号通路是否参与ICA促分化作用以及两条通路是否存在交互作用,为合理开发利用ICA奠定理论基础。 方法:不同浓度(10-10-10-5M)的ICA干预MC3T3-E1细胞3、6、9天后采用MTT法检测细胞增殖程度以及测定碱性磷酸酶活性,确定ICA最适促分化浓度。最适ICA浓度干预MC3T3-E1细胞7天后应用实时定量PCR法检测BMP和Wnt/β-catenin信号通路相关分子的基因表达。最后ICA与BMP或Wnt/β-catenin信号通路抑制剂(Noggin、DKK-1)联合使用干预MC3T3-E1细胞,茜素红钙结节染色观察钙化程度以及Western Blot检测BMP-2蛋白表达变化。 结果:ICA促进MC3T3-E1的增殖和分化,且10-9MICA促进增殖和分化的能力最强。与对照组相比,ICA能明显上调BMP和Wnt/β-catenin信号通路相关分子(BMP-2、Runx2、β-catenin、cyclinD1)的mRNA表达。Noggin或DKK-1能减少细胞钙化,且两者联合作用时抑制更加明显。与ICA单独作用相比,DKK-1阻断Wnt/β-catenin信号通路,再使用ICA干预7天后,Western Blot结果显示BMP-2表达水平下降。 结论:ICA能促进MC3T3-E1细胞的增殖和分化,可能通过Wnt/β-catenin/BMP-2信号通路调控MC3T3-E1细胞的成骨分化。