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目的： 1．观察由Cx32组成的缝隙连接(gap junction, GJ)对依托铂苷抗肿瘤作用的影响； 2．观察鞣花酸(ellagic acid, EA)对依托泊苷(etoposide, VP-16)体外抗肿瘤作用的影响及其可能机制。 方法： 在转染Cx32并通过1μg/ml doxycycline诱导其稳定表达的HeLa细胞中，用以下方法进行研究： 1．细胞接种免疫荧光法观察GJ功能增强剂(retinoid, RA)、GJ功能抑制剂(18-α-GA和oleamide)及EA对由 Cx32组成缝隙连接细胞间通讯（gap junction intercellular communication, GJIC）的功能的影响。 2．“标准细胞集落形成分析法”测定VP-16对细胞生长的抑制作用（抗肿瘤作用）。用不同密度接种细胞的方法，获得生长融合细胞（有条件形成GJ）与生长未融合细胞（无形成GJ的条件）。在上述有GJ形成和无GJ形成的细胞，观察GJ功能和EA通过GJ功能对VP-16抗肿瘤作用的影响。 3．Hoechst33258荧光染色法和Annexin V/PI结合双染流式细胞术分别测定HeLa细胞凋亡率。 4．Western blotting法和免疫荧光法分别检测Cx32总蛋白和构成GJ功能的胞膜蛋白Cx32的表达。 结果： 1.由 Cx32组成的缝隙连接(gap junction, GJ)对依托铂苷抗肿瘤作用的影响 1.1“细胞接种荧光示踪法”实验结果表明：与对照组相比，25μM oleamide组和10μM18-α-GA组的细胞荧光传递功能显著降低，而10μM RA组的细胞荧光传递功能增强。“标准细胞集落形成分析法”实验结果显示：在生长融合细胞（GJ形成），VP-16对集落形成的抑制率为（0.42±0.02），显著高于生长未融合细胞（无GJ形成，0.25±0.03）；在高密度接种细胞（生长融合，有GJ形成）中，与对照组相比，25μM oleamide和10μM18-α-GA可抑制GJ功能，且能显著增高VP-16处理后的细胞集落形成率(P<0.01)；而10μM RA组可通过增强GJ功能，显著降低VP-16处理后的细胞集落形成率（P<0.01）；但在低密度接种细胞（生长未融合，无GJ形成），与对照组相比，oleamide,18-α-GA及RA对VP-16的集落形成抑制作用无明显影响（P>0.05）。结果证明：GJ功能可以增强VP-16的抗肿瘤作用。 1.2“Hoechst33258荧光染色法”实验结果显示，与空白组相比，30μM VP-16作用HeLa细胞24小时，细胞凋亡率明显增加；在生长融合细胞（GJ形成），VP-16诱导细胞凋亡率为（12.13±1.34）％，显著高于生长未融合的细胞（无GJ形成,6.03%±0.75%）。结果证明：GJ功能可以增强VP-16诱导细胞的凋亡作用。 2.鞣花酸(ellagic acid, EA)对依托泊苷(etoposide, VP-16)体外抗肿瘤作用的影响 2.1在生长融合细胞（GJ形成），VP-16（5μM）作用细胞1h后，联用EA（8μM）作用细胞24h，细胞集落形成率为（0.25±0.03），显著低于VP-16单用组（0.42±0.02）；而在生长未融合的细胞（无GJ形成），EA（8μM）对VP-16的集落形成抑制作用无明显影响（P>0.05）。结果证明：GJ功能可以增强EA对VP-16的抗肿瘤作用。 2.2“Annexin V/PI结合双染流式细胞术”实验结果显示：在有GJ形成的HeLa细胞，EA（8μM）和VP-16（30μM）联用作用于细胞24小时，早期凋亡率为（12.61±0.30）%，显著高于VP-16单用组（8.04±0.04）%。“Hoechst33258荧光染色法”实验结果表明：在有GJ形成的细胞，EA（8μM）和VP-16（30μM）联用作用于细胞24小时，其细胞晚期凋亡率为（17.04±0.56）%，显著高于VP-16单用组（12.13±0.30）%。结果证明：GJ功能可以增强EA对VP-16诱导细胞的凋亡作用。 2.3 EA（8μM）处理细胞24小时和48小时后，与对照组相比，”Western blotting”结果表明，Cx32总蛋白的表达增强；“免疫荧光法”结果显示，构成GJ功能的胞膜蛋白Cx32的荧光强度增强。 2.4“细胞接种免疫荧光法”结果显示：与对照组相比，EA（8μM）作用于生长融合细胞（有GJ形成）4小时，荧光传递功能无明显影响，而作用24小时和36小时，荧光传递功能显著增强。 结论： 1．GJ功能增强，可以增强依托泊苷的抗肿瘤作用，而GJ功能降低可以降低依托泊苷的抗肿瘤作用； 2．在生长融合的细胞（有GJ形成），鞣花酸可以增强依托泊苷体外抗肿瘤作用； 3．鞣花酸增强依托泊苷的体外抗肿瘤作用与增强Cx32总蛋白和形成GJ功能的胞膜蛋白Cx32表达有关； 4．鞣花酸增强依托泊苷的体外抗肿瘤作用与增强由Cx32组成的GJIC功能有关。