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目的:了解联合应用维生素E和维生素C对环境内分泌干扰物邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(Di-(2-ethylhcxyl)phthalate,DEHP)所致的睾丸发育异常的干预作用;初步探讨ROS-Nrf2-Notch1信号通路在其中的作用机制。方法:体内实验:将新生SD大鼠随机分为5组,即玉米油对照组、DEHP暴露组、维生素E组、维生素C组以及联合维生素E和维生素C组。药物剂量:DEHP 500mg/kg、维生素E 200mg/kg、维生素C100mg/kg,连续灌胃30天。于PND36麻醉并处死,测量肛门生殖器距离和肛门生殖指数,检测睾酮含量和观察睾丸组织形态学改变,Western blot检测氧化应激指标和Notch信号表达情况,免疫荧光检测睾丸组织Nrf2表达情况。各组取3只于PND90作精子计数。体外试验:取10只PND7大鼠睾丸,体外培养睾丸Leydig细胞,分别予MEHP和MEHP+联合维生素处理24h,MTT检测细胞活性并检测ROS水平。结果:与对照组相比,DEHP暴露组的肛门生殖指数和精子计数明显下降,(p<0.05),与联合维生素组之间没有显著差异(p>0.05);联合维生素组的睾丸组织中睾酮含量明显增加(p<0.01)。HE染色发现DEHP暴露后,大鼠睾丸曲细精管结构紊乱,上皮严重萎缩,生精细胞数量极少并且脱落;联合维生素组的睾丸曲细精管结构保存尚好,形态较单独应用一种维生素有所恢复。DEHP暴露组氧化应激指标(Nrf2、HO-1、NQO1、GPX1及SOD1)表达较对照组和联合维生素组增高,Notch1及Hes1的表达水平较对照组和联合维生素组下降,上述指标在对照组和联合维生素组之间没有统计学差异(p>0.05)。Nrf2的组织免疫荧光结果与Western blot结果相一致,并以Leydig细胞表达为主。体外条件下,MTT结果显示联合维生素干预后明显改善Leydig细胞活力(p<0.05),并降低细胞内ROS生成水平(p<0.01)。结论:1)生后暴露DEHP能够引起雄性SD大鼠生殖功能障碍,氧化应激损伤可能起重要作用;2)ROS-Nrf2-Notch1信号通路异常介导的睾丸Leydig细胞氧化应激损伤在DEHP所引起的睾丸发育异常中可能起重要作用;3)联合维生素可能通过抵抗ROS作用进而稳定Nrf2功能和Notch1信号表达,维持Leydig细胞活性,最终恢复生精功能。