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目的:通过检测梅毒血清固定患者外周血调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)与辅助性T细胞17(Help er T lymphocyte17,Th17)的细胞比例和特异性转录因子及相关细胞因子的变化,初步探讨Treg/Th17细胞平衡在梅毒血清固定现象中的作用。 方法:研究对象均为徐州市第一人民医院医院皮肤科门诊确诊为梅毒血清固定的患者,判定标准:确诊梅毒并经规则治疗(苄星青霉素240万U肌内注射,每周一次,连续3周或以上),2年RPR反应不转阴者,排除再感染、神经梅毒(本文收集的病例都是确诊为梅毒并随访两年或两年以上的患者,梅毒患者两年血清反应不转阴者均行脑脊液检查,以排除神经梅毒)、其它感染(如HIV、HBV感染等)及自身免疫性疾病的患者。 共收集梅毒血清固定患者30例,其中男16例,女14例,年龄19-55[(35.68±8.97)]。患者血清RPR滴度:1∶2共14例,1∶4共10例,1∶8共5例,1∶16共1例。回顾患者既往病史,初次治疗时梅毒的分期分别为:一期梅毒12例,二期梅毒2例,早期潜伏梅毒16例。正常对照组为健康献血者,共收集30例,其中男14例,女12例,年龄23-56岁[(33.64±5.12)]。 从细胞和分子两个层面探讨Treg和Th17细胞的变化。 1.细胞水平:采用流式细胞术(Flow cytometry, FCM)检测外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMC)中CD4+CD25+ FoxP3+Treg和CD4+IL-17A+Th17细胞在CD4+T细胞中的比例; 2.分子水平:采用实时定量PCR方法检测Treg和Th17细胞特异性转录因子及相关细胞因子叉状头转录因子P3(forkhead transcription factor P3,FoxP3)、细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(cytotoxic Tlymphocyte antigen-4,CTLA-4)、IL-10、转化生长因子β(transforming growth factorβ,TGF-β)和孤独受体γt(orphan nuclearreceptor gammat,RORγ t)、IL-17mRNA的表达。 结果:1.流式细胞术检测梅毒血清固定组患者外周血CD4+T细胞中,CD4+CD25+ FoxP3+Treg细胞比例(15.28±8.84)%明显高于正常对照组(8.13±3.59)%(P<0.05),CD4+ IL-17A+Th17细胞比例(4.25±2.18)%显著低于健康对照组(8.67±2.08)%(P<0.05); 2.实时定量PCR方法检测梅毒血清固定患者外周血中,梅毒血清固定患者外周血FoxP3、CTLA-4、IL-10、TGF-β的表达量(0.0305±0.0046、0.0128±0.0012、0.0025±0.0002、0.0554±0.0065)明显高于正常对照组(0.0113±0.0018、0.0080±0.0022、0.0009±0.0002、0.0228±0.0046)(P<0.05),RORγt和IL-17的mRNA相对表达量(0.0017±0.0003、0.0023±0.0006)明显低于健康对照组mRNA相对表达量(0.0073±0.0014、0.0046±0.0008)(P<0.05)。在所有受试者外周血CD4+T细胞中Foxp3和ROR-γt的表达呈负相关关系(r=0.791,P<0.05)。 结论:梅毒血清固定患者外周血存在着Treg/Th17细胞平衡的异常,这种异常可能导致机体抗感染能力下降,患者体内梅毒螺旋体未能清除干净,刺激机体持续产生抗体,可能是血清固定现象形成的重要原因之一。