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背景:耳聋是最常见的感觉障碍性疾病之一,新生儿重度听力障碍者约占1～3‰,其中约50%属于遗传性耳聋。遗传性耳聋具有极强的遗传异质性,约70%为非综合征型(nonsyndromic hearing loss,NSHL)。至2009年5月止,共定位遗传性非综合征型耳聋(Nonsyndromic Hearing Loss,NSHL)相关染色体位点137个,克隆相关基因48个。其中,GJB2基因为最常见的耳聋相关基因,该基因的突变在高加索人群中与50%左右的先天性耳聋相关;其次为SLC26A4,占5%～10%;与线粒体基因突变相关的占1%左右。其余各型NSHL均仅占较小比例。第一部分变性高效液相色谱法分析非综合征型耳聋人群SLC26A4基因突变目的:运用DHPLC研究非综合征型耳聋(nonsyndromic hearingloss,NSHL)患者SLC26A4基因的突变情况,为临床上NSHL患者基因诊断提供指导。方法:PCR分别扩增SLC26A4基因的21个外显子及其侧翼序列,所得目的片段用变性高效液相色谱(denaturing high-performanceliquid chromatorgraphy,DHPLC)进行突变筛查,有异常峰形的样本进行DNA测序。结果:在所选30例无血缘关系且GJB2基因检测未发现突变的NSHL患者中,运用DHPLC技术共检测出10种SLC26A4基因变异,其中包括7种已知突变,2种未见报道的新突变(F572L和D87Y),及一种已知多态(Ivs11+47T＞C),其中Ivs7-2A＞G是最常见的突变,约占总突变的40%。结论:利用DHPLC+测序技术对SLC26A4进行筛查可降低检测成本,SLC26A4基因为仅次于GJB2的导致NSHL的相关基因,在GJB2基因检测未发现突变的NSHL人群中SLC26A4基因的检出率达到23.3%,其中Ivs7-2A＞G是其最常见的突变第二部分:运用PCR-RFLP技术快速检测中国耳聋人群热点基因突变目的:通过筛查耳聋基因热点突变:GJB2基因的235delC、SLC26A4基因的IVS7-2A＞G和线粒体12S rRNA(12S)基因1555 A＞G达到快速诊断耳聋患者。方法:多重PCR-RFLP技术对耳聋患者进行三个基因的三个热点突变的筛查、GJB2基因的235delC、SLC26A4基因的IVS7-2A＞G和线粒体12S rRNA(12S)基因1555 A＞G。有必要时,再联合变性高效液相色谱(denaturing high-performance liquid chromatorgraphy,DHPLC)和测序进行下一步检测。结果:200例耳聋患者中,共检测出235delC纯合突变18例,杂合突变18例;IVS7-2A＞G纯合突变2例,杂合突变13例;1555 A＞G突变8例。此方法结果均与测序结果相符合。三个热点突变基因的致病单体的检出率为21.7%(71/400+8/200=0.217),基因诊断率为14%((18+2+8)/200=0.14)。联合DHPLC和测序分析后,总体的基因诊断率为18.5%(37/200)。结论:利用PCR-RFLP技术检测耳聋患者的热点突变是一种快速、简便、高效、经济的耳聋致病基因筛查的方法。