目的：辣椒碱是从茄科植物辣椒CapsicumfrutescensL.的果实中分离的辛辣物质——辣椒素的主要成分。辣椒素在辣椒中的含量为0.1％～1％，其中有五种组成物的含量之和已接近100％，包括辣椒碱约69％，二氢辣椒碱约22％，降二氢辣椒碱约7％，高二氢辣椒碱约1％。 在医学上，辣椒碱显示了广泛的生理活性，包括抗高血压、降血脂。局部应用辣椒碱也可以治疗各种疾病，例如风湿性关节炎、骨关节炎、肌肉疼痛、背痛、撞伤、拉伤、扭伤，以及糖尿病性神经痛、带状泡疹后遗神经痛、三又神经痛、过敏性鼻炎、牛皮癣等。辣椒碱止痛的作用机理主要是耗竭神经介质P物质。由于P物质被耗蝎，神经元变得迟钝，对外周伤害性刺激脱敏。神经元脱敏是辣椒碱治疗作用的基础。 但由于辣椒高度的肝首过效应及非常短的半衰期，经皮给药能绕过肝脏及维持平稳的血药浓度，是辣椒碱发挥全身及局部作用合适的给药系统。目前，市场上辣椒碱局部产品，包括霜剂、贴片及橡皮膏剂，均在应用部位有明显灼痛感，导致皮肤红斑。同时，皮肤角质层对药物的透皮吸收具有阻碍作用，因此，消除辣椒碱的不良反应并保留其功效是研究开发辣椒碱临床应用的主要目标。 目前，提高药物透过皮肤角质层的方法包括微粒载体(泡囊、微乳、类脂毫微粒等)，化学促进剂(氮酮、挥发油等)，物理促渗技术(离子导入、电穿孔、超声波等)。其中，各种泡囊载体以其毒性小、不对皮肤造成伤害，促进各种性质药物(脂溶性、水溶性、大分子)穿过皮肤角质层而备受注目。新型泡囊——传递体(transfersomes)具有高度变形与弹性，能穿过比其自身小数倍的孔道，比传统脂质体有更高的皮肤渗透性已得到广泛的认同。 本文采用传递体(transfersomes)包裹辣椒碱以减少局部应用带来毒副反应，同时，增加透皮作用。内容包括辣椒碱的提取、分离与纯化，辣椒碱传递体制各，动物、人体皮肤体内外渗透性及药效学评价。 方法：(1)辣椒碱提取分离与纯化。以河北定州王为原料，70％乙醇，回流提取2次，每次2h提取辣椒碱类化合物及辣椒色素，并采用HPLC法测定其辣椒碱类含量。乙醇提取液减压浓缩成浸膏，用2％NaOH溶液溶解，控制溶液的pH为11，离心(2000rpm，15mmin)，分离上清液。用石油醚自上清液中萃取辣椒色素。残留的碱水液中加入10％HCl，调节溶液的pH至3，加入乙酸乙酯萃取辣椒碱类化合物。以硅胶G为层析材料，洗脱剂为石油醚及丙酮(3∶1)，分离辣椒碱及二氢辣椒碱。再经反向硅胶柱层析，以洗脱剂为甲醇及水(7∶3)分离辣椒碱。 (2)辣椒碱传递体的制备及结构大小、包封率测定。采用薄膜分散法、薄膜-高压匀质法及滴入-高剪切分散法制备辣椒碱传递体，透射电镜及zetasizer激光光子粒度仪测定传递体结构及大小，葡聚糖G50微型凝胶测定包封率，并对操作条件，包括影响包封与未包封药物分离的因素，即微柱中水量、离心转速及时间等的影响进行了研究。葡聚糖充分溶胀后填入5ml注射剂针筒中制成微柱，离心(1000rpm，6s)，除去葡聚糖凝胶微柱中部分水分，将0.4ml辣椒碱传递体滴加到柱中以后，离心(2000rpm，5min)，分离包封及未包封辣椒碱，一阶导数法扣除背景干扰测定辣椒碱传递体包封率。以包封率的改变、聚集及颜色为指标，考查辣椒碱传递体在4℃，25℃，37℃，相对湿度75％，贮存6个月的稳定性。 (3)辣椒碱传递体释放度与体外皮肤渗透性。辣椒碱从传递体的释放速度用Franz扩散池测定。以50％乙醇-生理盐水为接受液，供药池一侧加入含辣椒碱500μg的传递体，在32℃、搅拌速速为500r.min-1接受池条件下进行释放度实验。扩散池与供给池之间为纤维素膜(截留分子量8000-14000)，扩散池面积2.92cm2。在第2、4、6、8、10、12、24h定时取样0.5ml，立即补充等量的新鲜介质，样品采用前述HPLC测定。体外透皮试验同释放度，用小鼠、大鼠或人体腹部皮肤替代半透膜。皮肤的角质面面向供给池，真皮面面向接受池。 (4)辣椒碱传递体局部皮肤应用后体内组织分布。单剂量或多剂量局部应用辣椒碱传递体及腹腔注射辣椒碱注射剂后辣椒碱在血浆、后大腿的皮肤、肌肉及骨胳的分布采用大鼠为动物模型进行评价。用含6％Na2S的脱毛液将大鼠一只后大腿的毛脱掉，让其恢复24h。相当于500μg辣椒碱的辣椒碱传递体涂于该侧大腿，面积约3cm2，大鼠单独放到鼠笼中防止药物流失。注射给药是腹腔注射相当于500μg辣椒碱的辣椒碱注射液。在设定的时间间隔(注射给药0.5、1、1.5、2、4、6h，局部给药2、4、6、8、10、12h)从颈静脉取血4ml，然后断颈处死大鼠，分离大腿的皮肤、肌肉及骨胳。离心分离血浆，其他组织匀浆处理。所有组织用HCl调节pH3，然后用正已烷萃取，正已烷萃取液直接用荧光分光光度法测定其中辣椒碱。除给药方式不同，多剂量的处理方法与单剂量处理方法相同。 (5)辣椒碱传递体局部应用药效学及毒理学评价。采用KM小白鼠热板和扭体法模型，评价单剂量辣椒碱传递体不同剂量镇痛效果，并与口服与注射给药进行比较。采用KM小白鼠热板和扭体法模型、二甲苯所致小鼠耳廓肿胀及毛细血管通透性增高模型，评价多剂量局部应用辣椒碱传递体的镇痛抗炎效果。实验中各项数据均以(x)±s表示，用OnewayANOVA多重比较进行F检验，比较实验组与对照组及各组间差异。采用Hartley豚鼠来考察辣椒碱传递体单次及多次给药后，对完整及破损皮肤的刺激性。 结果：(1)辣椒碱提取分离与纯化。在测定的药材中，河北定州王、四川辣椒王中辣椒碱含量(0.134～0.145％)远远高于其他品种(0.013～0.083％)。将河北定州王的籽与皮分开测定，发现辣椒皮中(1.23％)辣椒碱是辣椒籽(0.189％)的6.5倍。以河北定州王为原料，经提取分离纯化所得结晶，采用UV、TLC、HPLC及熔点确认该成分为辣椒碱单体结构。 (2)辣椒碱传递体的制备及结构大小、包封率、稳定性测定。薄膜分散法、薄膜-高压匀质法及滴入-高剪切法制各辣椒碱传递体，透射电镜及zetasizer激光光子粒度仪测定辣椒碱传递体粒径分别为3-5μm，80nmand150nm。滴入-高剪切法、薄膜-高压匀质法均能得到纳米级的传递体泡囊，结构为小单室。 (3)释放速度剂体外皮肤渗透性。释放度速度表明，在最初的4h，累积释放量线性增加，4h后释放比较平缓。传递体中辣椒碱累积透皮量显著高于霜剂、混悬液。传递体中胆酸钠的比例升高，辣椒碱于大鼠腹部皮肤的累积透过率稍有增加。用司盘-80及吐温-80两种表面活性剂取代胆酸钠，累积透过率几乎没有改变。比较传递体中辣椒碱在小鼠、大鼠及人的体外皮肤透过性，结果小鼠＞＞大鼠＞＞人。比较传递体中辣椒碱在人体腹部完整皮肤、角质层、真皮层体外累积透皮量，角质层＞＞真皮层、完整皮肤。 (4)局部应用辣椒碱传递体后辣椒碱体内组织分布。大鼠腹部单次注射辣椒碱注射液，辣椒碱血药浓度显著高于其它组织，注射后1h达到峰值，4h基本降至零。局部单次给药，辣椒碱在大腿皮肤的浓度显著高于其它组织，这与局部给以辣椒碱传递体，药物需要从泡囊释放并要穿透皮肤而具有滞后作用有关。单次给药，无论是注射还是局部给药，辣椒碱在肌肉及骨头的浓度均较低，这与单剂量药效学效果较差相一致。连续5天多剂量给药，与单次给药相比，辣椒碱在各组织中均达到了稳态，浓度平稳且具有较高水平。 (5)辣椒碱传递体局部应用药效学及毒理学评价。单剂量注射给药，高剂量(2.5mg/kg)能明显延长小鼠舔后足时间及减少扭体次数(p＜0.05)，显示较强的镇痛效果。与注射给药45min分钟发挥药效不同，单剂量口服给药60分钟才起效，而单剂量皮肤局部给药，镇痛效果不理想(P＞0.05)。多剂量局部应用辣椒碱传递体，不仅能显著抑制二甲苯所致耳廓肿胀，显示较强的抗炎活性，而且明显延长小鼠舔后足时间及减少冰醋酸刺激引起的扭体次数(p＜0.05)，镇痛效果明显且呈现剂量依赖性。无论单次还是多次给药，辣椒碱传递体对正常及损伤皮肤均无刺激性。相反，辣椒颠茄贴膏在相同条件下对皮肤有一定的刺激性。 结论：辣椒药材乙醇回流提取液经酸碱-有机溶剂萃取及硅胶G柱层析分离得到辣椒碱并采用UV、TL℃、HPL℃及熔点确认了辣椒碱单体结构，关于辣椒碱单体结构的分离及确认本文属首次报道。 传递体体中辣椒碱外累积透皮量显著高于霜剂、混悬液，说明传递体确有增加药物透皮作用。辣椒碱小鼠腹部皮肤累积透皮量显著高于大鼠及人体皮肤，而大鼠的累积透皮量也显著高于人体，因此，小鼠及大鼠是否适合作为透皮制剂透皮研究的动物值得思考。而在人体，角质层的累积透皮量显著高于真皮层及完整皮肤，不同于一般的推测，认为角质层是透皮吸收的主要障碍的说法，这与离体皮肤与活体动物皮肤状态不一样有关。 单次给药局部给药，辣椒碱在大腿皮肤的浓度显著高于其它组织，注射给药，血液中浓度最高。无论是注射还是局部给药，辣椒碱在肌肉及骨胳的浓度均较低，说明单次给药，难以达到理想治疗浓度。多剂量给药，辣椒碱在各组织中均达到了稳态，浓度平稳且高于单次给药。 单剂量局部应用辣椒碱传递体，镇痛效果不理想，与前面单次给药辣椒碱在相关组织浓度较低的结果相吻合。多剂量抗炎、镇痛作用较强，证实了辣椒碱传递体的有效性。辣椒碱传递体单次及多次给药对完整及破损皮肤均无刺激。 研究结果表明，辣椒碱传递体达到了增强透皮作用、增进疗效，减少皮肤刺激性的效果。