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目的:采用β-淀粉样蛋白(amyloid-beta protein,Aβ)脑室注射方法建立阿尔茨海默病(Alzheimer,s disease,AD)大鼠模型,并用通心络进行干预,通过观察大鼠学习记忆能力、血清和脑组织匀浆中氧化应激、脑组织匀浆胆碱能相关指标、免疫组化检测海马β-淀粉样前体蛋白(β-amy1oid precursor protein ,APP)表达、刚果红染色检测海马Aβ表达、Westerblot检测海马tau蛋白表达的改变,为通心络临床治疗AD提供实验依据。方法:实验一通心络对Aβ所致AD模型大鼠学习记忆功能的影响健康雄性SD大鼠70只,体重250～300g,随机分为7组:(1)正常组;(2)假手术组;(3)模型组;(4)通心络小剂量组(0.6g生药/kg.d);(5)通心络中剂量组(1.2g生药/kg.d);(6)通心络大剂量组(2.4g生药/kg.d);(7)金纳多组(0.032g生药/kg.d)。用侧脑室注射Aβ的方法建立AD大鼠模型,假手术组注射等量生理盐水,手术3天后进行药物干预,正常组、假手术组、模型组给予相同剂量的生理盐水。给药21天后,采用Morris水迷宫检测各组大鼠的平均逃避潜伏期时间和游泳总路程,共6d。实验二通心络对Aβ所致AD模型大鼠氧化应激的影响实验动物分组及给药同实验一,给药30天后,大鼠颈总动脉取血,分离血清,断头取脑,切取海马部位匀浆离心,黄嘌呤氧化酶法检测SOD的含量,硫代巴比妥酸(TBA)比色分析法检测MDA含量,化学比色法检测GSH-Px活性。实验三通心络对Aβ所致AD模型大鼠胆碱能系统功能的影响实验动物分组及给药同实验一,给药30天后,大鼠断头取脑,切取海马部位匀浆离心,用硫代丁酰胆碱比色法检测ChE酶活性,比色法检测AchE酶活性。实验四通心络对Aβ所致AD模型大鼠海马APP、Aβ表达的影响实验分组及给药方法同实验一。给药30天后,大鼠心脏灌注取脑, 4%多聚甲醛固定,常规梯度酒精脱水,二甲苯透明后,浸蜡,石蜡包埋,皮质和海马连续切片,免疫组化检测海马APP的表达。切片脱蜡至水,甲醇刚果红染液染色,用碱性乙醇分化液分化,水洗,苏木素复染,脱水,透明,封固,检测大脑海马Aβ的表达。实验五通心络对Aβ所致AD模型大鼠海马磷酸化Tau蛋白的影响实验分组及给药方法同实验一。给药30天后,断头取脑,快速切下海马,研磨后进行蛋白定量,Westernblot检测各组大鼠海马Tau蛋白表达的改变。结果:1各组大鼠水迷宫行为学的改变结果显示1.1潜伏期(s):实验期间,与正常组比较,模型组逃避潜伏期时间明显延长,有统计学意义(P<0.01),而假手术组和正常组相比无显著性差异(P>0.05)。实验第1d,各用药组与模型组相比无显著性差异(P>0.05);第2d通心络大、小剂量组、金纳多组与模型组相比潜伏期明显缩短,且有统计学意义(P<0.05,P<0.01);第3-6d,各用药组潜伏期与模型组相比均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。1.2总路程(cm):实验期间,与正常组比较,模型组游泳总路程明显延长,有统计学意义(P<0.01),而假手术组和正常组相比无显著性差异(P>0.05)。第1d,各用药组与模型组相比无显著性差异(P>0.05);从第2d开始,金纳多组与模型组相比总路程明显缩短(P<0.01);第3d,通心络中剂量组,金纳多组与模型组相比总路程明显缩短(P<0.05);第4、5d通心络大、中、小剂量组,与模型组相比总路程缩短有统计学差异(P<0.05,P<0.01),第6d,各用药组总路程均缩短,其中通心络中、小剂量组、金纳多组与模型组相比有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。2.各组大鼠SOD、GSH-Px、MDA活性的改变结果显示2.1各组大鼠脑组织匀浆SOD、GSH-Px、MDA活性的改变结果显示与正常组相比,模型组SOD、GSH-Px活性显著降低,MDA含量显著升高,均有统计学意义(P<0.01);各指标假手术组与正常组相比均无显著性差异(P>0.05);与模型组相比,各用药组SOD活性均明显升高,MDA含量均显著降低,有统计学意义(P<0.05,P<0.01);GSH-Px活性,与模型组相比,通心络大、中剂量组活性均明显增高,有统计学意义(P<0.01),而通心络小剂量组、金纳多组与模型组相比无显著性差异(P>0.05)。2.2各组大鼠血清中SOD、GSH-Px、MDA活性的改变结果显示与正常组相比,模型组SOD活性、GSH-Px活性显著降低,MDA含量显著升高,均有统计学意义(P<0.01);各指标假手术组与正常组相比均无显著性差异(P>0.05);与模型组相比,各用药组SOD活性均明显增高,MDA含量均显著降低,有统计学意义(P<0.05,P<0.01);而GSH-Px活性,仅见通心络大剂量组明显增高,有统计学意义(P<0.01)。3.各组大鼠ChE、AchE酶活性的改变结果显示与正常组相比,模型组ChE、AchE酶活性显著升高,有统计学意义(P<0.01);而假手术组与正常组相比无显著性差异(P>0.05);与模型组相比,各用药组ChE、AchE酶活性均明显降低,有统计学意义(P<0.01)。4.各组大鼠海马区APP、Aβ表达的改变4.1各组大鼠海马区APP表达的改变结果显示正常组:APP少量阳性细胞,且染色较弱,表达量较低,海马区与大鼠大脑皮质部分均有少量分布。假手术组:APP少量阳性细胞,且染色较弱,表达量较低,海马区与大鼠大脑皮质部分均有少量分布。模型组:APP阳性细胞大量表达,且多呈强阳性染色,广泛分布于海马区,大鼠大脑皮质部分分布。通心络大中小剂量组可见APP阳性细胞,染色较强,有一定表达,海马区广泛分布,大鼠大脑皮质部分有少量分布。金纳多组可见APP阳性细胞数目表达很多,多成强阳性染色,广泛分布于海马区,大鼠大脑皮质部分分布。4.2各组大鼠海马区Aβ表达的改变结果显示正常组:刚果红染色阴性,尼氏小体丰富清晰。假手术组:刚果红染色阴性,尼氏小体丰富清晰。模型组:刚果红染色呈阳性反应,神经元尼氏小体着色淡,结构紊乱不清晰。通心络大剂量组:刚果红染色呈阳性反应,神经元尼氏小体着色淡。通心络中剂量组:刚果红染色呈阳性反应,神经元尼氏小体着色淡。通心络小剂量组:刚果红染色呈阳性反应,神经元尼氏小体着色淡。金纳多组:染色呈阳性反应,神经元尼氏小体着色淡,结构紊乱不清晰。5.各组大鼠海马区磷酸化Tau蛋白表达的改变结果显示与正常组相比,模型组磷酸化Tau蛋白OD值明显升高,且有统计学意义(P<0.01);而假手术组与正常组相比无显著性差异(P>0.05);与模型组相比,各用药组磷酸化Tau蛋白OD值明显降低,有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论:1.络病学说是中医理论特色组成部分元气亏虚而致的脉络瘀阻是痴呆发病及加重的关键因素及重要病理环节,气血津液运行失常,体内生理或病理产物不能及时排除,蓄积体内,生成瘀血,瘀血阻滞脉络,脉络“血主濡之”功能失常,即脉络在末端发生的供血供气、津血互换、营养代谢三大功能活动功能失常,不能为气络功能活动提供物质基础,气络失去血液及其他营养物质的濡养,就会更加加重气络损伤,温煦调养和信息传达功能失常,而出现痴呆证候。2.通心络可以显著改善Aβ脑室注射所致AD模型大鼠学习记忆功能的障碍,其作用可能是通过减轻体内体内自由基增多引起的氧化应激损伤,降低胆碱酯酶活性保护胆碱能系统的功能,降低大鼠海马区APP的过量表达所致Aβ的沉积,减少海马区磷酸化tau蛋白的过度表达引起的神经纤维缠结的形成造成的神经元的变性坏死而实现。