[背景]帕金森病(Parkinson’s disease,PD)是一种常见于中老年人的神经系统变性病,其病程进行性加重,不可治愈,后期有致残风险,严重影响患者生活质量。有研究证实:PD患者在症状出现前约80%的患者纹状体多巴胺减少,60%-70%的患者黑质神经元存在变性。因此,寻求临床应用便捷,灵敏度高的的早期诊断技术非常有必要。磁共振波谱分析(Magnetic Resonance Spectroscopy,MRS)技术,可无创地观察人体分子层面的生化改变及组织代谢。针对氢质子的MRS被称作1H-MRS,它在脑组织的研究中应用更为广泛,可以检测的脑组织中的代谢物主要有N-乙酰天门冬氨酸(N-acetylaspartate,NAA)、胆碱(Choline,Cho)、肌酸(Creatine,Cr)等,为PD病因研究、疾病诊断及鉴别诊断、疾病进展监测、疾病预后评估提供了新的技术方法。PD的经典病理改变为黑质致密区多巴胺能神经元变性丢失、残存神经元内出现以α-突触核蛋白(α-synuclein,α-syn)为关键成分的路易小体(Lewy body,LB)。α-syn是一种位于神经元突触前末端、由140个氨基酸组成的蛋白质,其突变或过度积累导致α-syn形成寡聚体,可影响细胞正常的生理功能,甚至导致细胞死亡。因此探讨α-syn寡聚体形成及其降解途径成为的基础研究新热点,或成为突触核蛋白病潜在的治疗靶点。发生在溶酶体中的分子伴侣介导的自噬途径(chaperone mediated autophagy,CMA)是哺乳动物细胞的蛋白水解途径之一,可以除去错误折叠的蛋白质。α-syn寡聚体可通过上述途径降解。其中,溶酶体中的组织蛋白酶D(CathepsinD,CathD),已被证实可防止α-syn聚集和毒性;分子伴侣是一类介导协助蛋白形成与维持天然构象的重要细胞因子,可保证蛋白质的正确折叠与组装。热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)即属于分子伴侣的一种,目前研究发现其可以抑制α-syn的过度表达和聚集。PD治疗主要有药物与手术治疗两方面,除部分符合手术标准及经济条件允许的患者外,目前PD治疗多采取西药口服的方式。临床及文献中均表明,PD患者单用西药会出现药效减退、开关现象、异动症等副作用,并且西药对于PD非运动症状几乎无效。中医药通过辨证论治等理论指导,可以辅助西药治疗,有效减少西药副作用,延缓疾病进展,整体调节患者身体状态。滋肾益髓方(楮实子、沙苑子、枸杞子、黄精、熟地黄、肉苁蓉、龟板)既滋肾阴,又补肾阳,佐以平肝健脾,具有补肾填精,益脑生髓之功,可以减低帕金森病模型小鼠脑中α-syn的表达,但其影响α-syn的表达机制尚不清楚;并可改善患者运动及非运动症状,尤其是对睡眠障碍、便秘、异常汗出、神经精神症状等非运动症状改善明显,有效地提高了患者生存质量。帕金森病中医生存质量量表(初稿(PD-QOL))是在严格的中医药理论指导下,参照国际公认的量表研制方法建立的针对PD患者生存质量的具有中医特色的量表,对进一步探究中医药治疗PD的优势具有重要意义。[目的]为了进一步研究滋肾益髓方对于PD患者生存质量以及脑内黑质区神经元活性的影响,为该方治疗PD提供影像学证据,并探究滋肾益髓方对于PD模型小鼠脑内a-syn寡聚体通过分子伴侣介导的自噬(CMA)的降解途径作用及其治疗PD可能的机制,本研究拟分为临床与实验两部分。临床研究以(PD-QOL)为评价手段,探究滋肾益髓方对于PD患者生存质量的影响,并以“磁共振波谱评价黑质代谢物主要变化”为切入点探讨滋肾益髓方干预方案对帕金森病患者黑质中主要代谢产物NAA、Cho、Cr表达的影响,拟证实该方对于PD患者黑质多巴胺能神经元的保护作用。实验研究以CMA途径的关键酶CathD与重要分子Hsp70为靶点,探究滋肾益髓方对PD小鼠脑内溶酶体途径的调节的影响,明确对PD小鼠脑内a-syn寡聚体的降解作用的机制。[方法]1、临床研究方法临床研究纳入符合标准的PD患者50例,以抗PD西药治疗为基础,加用中药滋肾益髓方治疗3个月,于入组时、治疗3月分别进行PD 一般资料收集,评定患者PD-QOL量表总分及Ⅱ、Ⅲ维度(PD-QOL-Ⅰ、PD-QOL-Ⅱ)得分,统一帕金森病评定量表(Unified Parkinson’s disease rating scale,UPDRS)总分及 Ⅱ、Ⅲ 维度(UPDRS-Ⅱ、Ⅲ)得分,以及Hoehn-Yahr分级、帕金森病运动功能评定量表(Motor dysfunction rating scale for Parkinson’s disease,MDRSPD)、非运动症状调查问卷(Non-motor Symptoms Questionnaire,NMS Quest)、MoCA量表、疲劳量表、嗜睡量表、睡眠量表、便秘量表等得分,并通过MRS采集PD患者双侧(致病重侧与致病轻侧,相当于研究中的“患肢对侧”“患肢同侧”,以下简称为“病重侧”“病轻侧”)大脑黑质区NAA、Cr、Cho数值,计算出NAA/Cr、Cho/Cr比值。通过对比治疗前后MRS数据变化,探究滋肾髓方治疗PD的影像学依据,并分别对入组时前述量表评分之间及其与MRS数据之间进行相关性分析。2、实验研究方法将C57BL/6雄性小鼠随机分为空白组、模型组、西药组和中药组。通过低剂量鱼藤酮长时间持续灌注法建立PD小鼠模型,后2组在造模后分别予美多芭及滋肾益髓方干预治疗。拟采用自主活动测试法观察小鼠行为学,采用免疫组织化学技术检测小鼠中脑黑质CathD、HSP70表达。[结果]:1、临床研究结果经过滋肾益髓方治疗后,PD患者PD-QOL总分及PD-QOL-Ⅰ、PD-QOL-Ⅱ得分均较治疗前显著下降(P<0.01),UPDRS总分及UPDRS-Ⅱ、UPDRS-Ⅲ得分较治疗前显著下降(P<0.05 或 P<0.01)。入组时 PD 患者 UPDRS-Ⅲ、UPDRS 总分与 PD-QOL-Ⅰ、PD-QOL-Ⅱ、PD-QOL 总分,UPDRS-Ⅱ 与 PD-QOL-Ⅰ、PD-QOL 总分呈正相关(P<0.05);MDRSPD 得分与 PD-QOL总分呈正相关(P<0.05),NMSQuest、MoCA、睡眠量表、嗜睡量表、疲劳量表、便秘量表与PD-QOL总分及各个维度无明显相关性。病重侧黑质NAA/Cr值显著低于病轻侧NAA/Cr值(P<0.05),经过滋肾益髓方治疗后,PD患者黑质区上述MRS数据较治疗前无明显下降(P>0.05)。入组时不同性别、分型与Hoehn-Yahr分级PD患者双侧黑质代谢物间无差异;PD患者年龄与病轻侧NAA/Cr有正相关性(P<0.05),其余黑质代谢物MRS数据与病程年龄均无相关性;PD患者病轻侧NAA/Cr与UPDRS-Ⅱ+Ⅲ及PD-QOL-Ⅰ、PD-QOL-Ⅰ+Ⅱ呈负相关,病轻侧 Cho/Cr 与 UPDRS-Ⅲ、UPDRS-Ⅱ+Ⅲ 及 PD-QOL-Ⅰ、PD-QOL-Ⅰ+Ⅱ 呈正相关(P<0.05);PD患者病重侧NAA含量、NAA/Cr含量与疲劳量表分值呈正相关(P<0.05);PD患者病重侧Cho含量与MoCA分值呈正相关,PD患者双侧黑质代谢物MRS数据与MDRSPD、NMS Quest无明显相关性。2、实验研究结果经过滋肾益髓方治疗后,中药组及西药组小鼠自主活动次数均较模型组明显增高(P<0.05),中药组与西药组无统计学差异。模型组小鼠黑质区CathD表达较空白组明显降低(P<0.05),西药组小鼠黑质CathD阳性表达较模型组明显增高(P<0.01),中药组小鼠黑质Cath D 阳性表达较模型组明显增高(P<0.05),中药组小鼠黑质CathD阳性表达较西药组明显降低(P<0.01)。模型组小鼠黑质区HSP70阳性表达较空白组明显降低(P<0.05),西药小鼠黑质HSP70阳性表达较模型组明显增高(P<0.05),中药小鼠黑质HSP70阳性表达较模型组明显增高(P<0.01),中药小鼠黑质HSP70阳性表达较西药组明显增高(P<0.01)。[结论]1、应用PD-QOL(初稿)量表作为评价手段,证实滋肾益髓方可以改善患者的运动症状及非运动症状,有效提高了患者的生存质量,说明患者生存质量的改善与运动及非运动症状密切相关,从而为中医药治疗帕金森病的推广提供了临床支持。2、应用MRS作为技术手段,证实滋肾益髓方可通过延缓NAA/Cr下降等途径,延缓PD患者黑质区神经元损害,保持神经元活性,为中医药治疗PD提供影像学依据,也为MRS评估对PD患者病情评估提供了支持。3、滋肾益髓方可通过增强PD模型小鼠脑内分子伴侣Hsp70与溶酶体中蛋白降解关键酶CathD含量,从而增强分子伴侣介导的的溶酶体途径,进而导致PD模型小鼠脑内α-syn寡聚体的降解,从而为该方治疗PD、降解α-syn寡聚体的可能作用机制提供了现代科学理论依据。