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土霉素(oxytetracycline, OTC)抗菌效果良好、价格低廉,但由于在兽药和饲料添加剂等方面被滥用,导致动物源性食品中OTC残留严重。目前酶联免疫检测(enzy me-linked immunosorbent assay, ELISA)是检测OTC等四环素类抗生素的标准方法,但交叉反应严重,且OTC属于半抗原,抗体制备困难,成本高。近年来发现的核酸配适体(aptamer)具有抗体的高亲和力、高特异性结合靶分子特性,且具有蛋白抗体无可比拟的其他优点。本课题拟建立基于配适体的酶联技术检测OTC。本课题合成了以OTC为靶分子的单链DNA配适体(76bp),研究了采用EMSA法检测OTC和配适体的亲和性。通过改变非变性聚丙烯酰胺凝胶的浓度、结合缓冲液的离子强度、淬火条件、应用EB染色和化学发光法都未检测到配适体和靶分子的结合；将OTC-HRP和B-ATP-aptamer互补链应用到EMSA试验,仍未检测结合。同样结合条件用超滤-HPLC法检测ATP-aptamer和OTC-aptamer的Kd值,分别为1.121μM、0.780μM。证明EMSA法不能用于OTC、ATP和配适体的结合检测。超滤-HPLC法证明生物素标记修饰5’端、Poly T修饰3’端对ATP-aptamer的Kd值影响不显著(P>0.05)；10%全脂牛奶对ATP-aptamer的Kd值有影响但不显著(P>0.05)；"ATP-aptamer-PCS2"对ATP与ATP-aptamer的结合影响较大。研究了链霉亲合素(streptavidin, SA)包被、B-OTC-aptamer在酶标板上固定、OTC酶标记。通过对包被条件比较试验,优化得出SA包被条件：选择洁特高亲和力板,采用碳酸缓冲液干法包被,SA浓度为2μg／mL,37℃温育16h至全干,包被效果最佳。干法包被的孔间差2.95%,批间差7.37%。每孔可结合B-OTC-aptamer 5.36 pmol。本研究建立的基于配适体的生物素—亲和素酶联检测方法能够定量测定OTC,最低检测限为1.512g/L, B-OTC-aptamer的IC50为7.56g／L,检测线性范围是3.02-16g/L,批内变异系数为10.32%,批间变异系数为16.46%。牛奶中回收率为71-84%。本方法的检测灵敏度未超过现有酶联免疫方法,说明配适体的亲和力、检测条件等还有待提高,但本项目的前期试验为以后的工作打下基础。