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目的:肝细胞生长因子(HGF)具有多种生物学功能,对器官的纤维化具有负性调节作用。肾间质纤维化是各种肾脏疾病发展至终末期肾功能衰竭的可靠和重要标志。转化生长因子β1(TGF-β1)是致肾间质纤维化的重要细胞因子。它可诱导肾小管上皮细胞—肌纤维母细胞转分化(TEMT),在肾间质纤维化中起重要作用。本研究探讨肝细胞生长因子(HGF)是否负性调节TGF~β1诱导的肾小管上皮细胞肌纤维母细胞转分化,以及HGF对TGF—β1的下游介质结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响,以阐明肝细胞生长因子抗肾纤维化的可能机制,为临床防治肾间质纤维化以及延缓终末期肾脏疾病进展提供实验依据和新的治疗思路。 方法:将体外培养的正常大鼠肾小管上皮细胞(NRK52E)分为8组,分别为空白对照组、不同剂量的HGF组、TGF—β1诱导组及不同剂量HGF阻断组。每组设3复孔,培养6天。应用倒置相差显微镜、扫描电镜观察细胞形态和超微结构;免疫组织化学方法检测肌纤维母细胞特异性标志物α—SMA;ELISA法分析测定培养细胞上清液中FN的含量;RT-PCR检测CTGFmRNA表达。 结果:①与对照组相比,TGF—β1诱导组细胞从原有典型的上皮细胞形态转变为长梭形肌成纤维细胞样形态;免疫组织化学染色见大量α—华西医学中心硕士学位论文SMA阳性细胞,a一SMA染色的平均积分光密度(IOD)值明显增加 (P<0.05);细胞培养上清液中FN含量增加(P<0.05);CTGFmRNA表达较其他各组明显增加(P<0.05)。②HGF对照组细胞形态学、a一SMA染色IOD值及FN含量与空白对照组无明显变化;不同浓度HGF组的CTGFmRNA表达较空白对照组均增加(P<0.05)。③HGF阻断组明显抑制了TGF一pl诱导的NRK52E细胞形态学改变;a一SMA染色roD值均比诱导组TGF一pl明显下降(P<0.05),且呈剂量依赖(P<0.05):HGF同时不同程度地抑制TGF一p刺激FN分泌(P<0 .05);显著地抑制TGF一pl诱导的CTGFmRNA表达(P<0.05);CTGF表达与a一SMA表达呈正相关(P<0.05)。 结论:1.TGF一阳可诱导肾小管上皮细胞肌纤维母细胞转分化,并促进细胞外基质成分FN的沉积和CTGF表达,这可能是其致纤维化作用的机制之一。 2.HGF能够负性调控TGF一pl诱导的TEMT作用,减少FN分泌,对肾间质纤维化具有负性调节作用。提示应用HGF治疗可能成为防治肾间质纤维化及慢性肾脏疾病进展的新的治疗手段。 3.HGF对TEMT的负性调节作用可能是通过减少CTGF表达来实现的。HGF针对CTGF机制是其防治肾间质纤维化及慢性肾脏疾病的重要机制之一。