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本实验以氯氰菊酯和氟氯苯氰菊酯为研究对象,合成了氯氰菊酯半抗原Cyp-Hp1和氟氯苯氰菊酯半抗原Flu-Hp2。采用活性酯法将半抗原与载体蛋白BSA和OVA共价偶联,制备人工抗原,经紫外分析确定偶联成功,以Cyp-Hp1-BSA和Flu-Hp2-BSA为免疫原免疫新西兰白兔,分别获得了针对氯氰菊酯和氟氯苯氰菊酯的特异性抗血清。间接ELISA法测定抗血清的中点效价为1.6×104,双向琼脂扩散法测定抗血清的效价为1/16。以硫酸铵分步盐析法分离抗血清中的抗体并冻干得抗氯氰菊酯抗体Ab1和抗氟氯苯氰菊酯抗体Ab2。分别用活性酯法和混合酸酐法制备了酶标半抗原（Cyp-Hp1-HRP和Flu-Hp2-HRP）,酶标记物既保持了免疫化学特性,又保持了酶活性,可用于免疫化学分析。进一步研究了pH值、离子强度和有机溶剂在包被抗体-酶标半抗原（E-H）直接竞争ELISA中对氯氰菊酯与Ab1亲和作用的影响。结果表明:包被介质pH为7.2时,固相载体对Ab1的吸附性最好;反应介质pH为7.0时,Ab1与氯氰菊酯的亲和作用最强;离子强度在一定范围内增大会提高Ab1与氯氰菊酯的亲和力;乙腈和丙酮对氯氰菊酯免疫分析结果的影响要大于甲醇。成功建立了氯氰菊酯直接竞争酶联免疫吸附分析法。方阵试验确定了Ab1最佳包被浓度为6μg/mL,酶标半抗原（Cyp-Hp1-HRP）最佳稀释度为64000倍。在优化条件下,建立了氯氰菊酯的标准抑制曲线,回归方程I=0.1919LogC+0.5618,R2 = 0.9913,线性范围为100～0.01μg/mL,抑制中浓度IC50= 0.461μg/mL,IC20=12ng/mL, RSD=17.26%（n=5）。在空白青菜样品中分别添加氯氰菊酯标样,使样品中氯氰菊酯的含量分别为0.5 mg/kg和5mg/kg两个水平。添加样品用丙酮提取,E-H直接竞争ELISA法测定,重复5次。氯氰菊酯添加浓度为0.5mg/kg水平时,回收率80.29%～89.20%,RSD为4.35%;氯氰菊酯添加浓度为5mg/kg水平时,回收率89.68%～120.78%,RSD为11.88%。说明E-H直接竞争ELISA法能满足氯氰菊酯残留分析的要求。成功建立了氟氯苯氰菊酯直接竞争酶联免疫吸附分析法。方阵试验确定了Ab2最佳包被浓度为6μg/mL,酶标半抗原（Flu-Hp2-HRP）最佳稀释度为384000倍。建立了氟氯苯氰菊酯的标准抑制曲线,回归方程I=0.1998LogC+0.6988,R2 = 0.9996,线性范围为10～0.01μg/mL,抑制中浓度IC50= 0.101μg/mL,IC20=3ng/mL, RSD=15.42%（n=5）。