目的:松花粉具有保护器官、调节代谢、增强免疫力等药理作用,但松花粉抗肿瘤作用及机制的研究仍不透彻。本研究通过观察松花粉对人肝癌细胞株SK-Hep-1细胞增殖、凋亡、细胞周期和自噬的影响,进一步探讨松花粉抗肝癌作用及其机制,为松花粉的临床应用提供理论和实验依据。方法:体外培养人肝癌SK-Hep-1细胞,随机分为4组,分别为对照组(0 mg/m L松花粉)、实验组(30、45、60 mg/m L松花粉)。(1)采用细胞增殖/毒性检测试剂盒CCK-8,检测不同浓度松花粉干预不同时间(12、24、48和72 h)后的SK-Hep-1细胞抑制率;(2)松花粉作用2 w后,平板克隆实验观察松花粉对SK-Hep-1细胞克隆、增殖的影响;(3)松花粉处理48 h后,倒置相差显微镜观察松花粉干预后的SK-Hep-1细胞形态学变化;(4)Hoechst 33258荧光染色法检测细胞凋亡的形态学变化和Annexin V-FITC/PI双染法结合流式细胞术观察细胞凋亡的情况;(5)流式细胞仪检测SK-Hep-1细胞的细胞周期变化;(6)RT-PCR方法检测自噬相关基因Beclin-1、LC3-Ⅱ、P62 m RNA的表达水平,Western blot法检测自噬相关基因Beclin-1、LC3-Ⅱ、P62的蛋白表达水平;(7)数据处理采用SPSS 23.0统计软件,计量资料以均数±标准差(mean±SD)表示,多组间比较采用one-way ANOVA或非参数检验进行比较,以P<0.05表示差异有统计学意义。结果:(1)CCK-8法检测显示,松花粉能明显抑制SK-Hep-1细胞增殖,并具有时间和剂量依赖性;(2)平板克隆实验显示,随着松花粉浓度的增高,细胞形成集落数量减少;(3)倒置相差显微镜显示,松花粉可以抑制细胞的增殖;(4)Hoechst 33258荧光染色显示,松花粉可以促进细胞凋亡;Annexin V-FITC/PI双染法显示,与对照组比较,松花粉不同浓度组干预后细胞凋亡率明显升高(P<0.05或P<0.01),并且细胞凋亡率随着药物作用浓度的增高而增加;(5)细胞周期实验显示,松花粉能使SK-Hep-1细胞周期阻滞于G1期,同时S期和G2期的细胞比例也下降;(6)RT-PCR分析显示,经松花粉(30、45、60 mg/m L)处理后,Beclin-1、LC3-Ⅱ的m RNA表达较对照组明显增加(P<0.05或P<0.01),而P62的m RNA表达较对照组降低(P<0.05或P<0.01);Western blot法检测自噬相关基因蛋白的表达水平,也同样得出相同的结论。这进一步证明了松花粉对人肝癌SK-Hep-1细胞具有促进自噬的作用。结论:(1)松花粉能明显降低人肝癌SK-Hep-1细胞增殖能力,且呈剂量和时间依赖性;松花粉能促进细胞的凋亡并使细胞阻滞于细胞周期G1期。(2)松花粉可使人肝癌SK-Hep-1细胞中自噬增强,促进人肝癌细胞株SK-Hep-1细胞的自噬作用,其机制可能是通过提高人肝癌SK-Hep-1细胞Beclin-1、LC3-Ⅱ表达,降低SK-Hep-1细胞P62表达,通过诱导自噬从而发挥抗肝癌的作用。