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植物内生真菌是在植物体内渡过全部或部分生活周期,而不使宿主植物表现出明显的病害症状的真菌。现已有报道表明,由药用植物中分离得到的内生真菌,能够产生与其宿主植物相同或相似的化学成分。本研究对几种具有抑菌作用药用植物的内生真菌进行分离,并对其代谢产物的抑菌活性进行筛选。对其中具有较强抑菌活性的人参内生真菌RP进行了更进一步的研究。对菌株RP生物学特性、各种培养条件对抑菌物质的影响进行了研究,并通过形态学和分子生物学方法对该菌株进行了属种鉴定。同时对该菌株抑菌活性成分进行初步的分离和鉴定研究。实验结果如下:1.采用组织块分离法,以PDA、CMA、MEA、HMA和TWA培养基为内生真菌分离培养基,在20℃下避光培养,对内生菌进行分离。实验发现以组织块印迹法对组织块表面消毒效果进行检测结果更加可靠,更灵敏。由12种药用植物的茎和叶及花序中分离得到48株内生真菌。其中茎内分离得到20株,叶内分离得到19株,花中分离得到9株。PDA-链霉素培养基为较适宜的分离培养基。2.对48株分离得到的内生真菌的菌块、发酵液和菌丝醇提液的抑菌活性分别进行了筛选,结果发现人参、黄芩、黄芪和柴胡4种药用植物中分离得到的内生真菌的菌块、发酵液和菌丝醇提液3部分均具有抑菌活性,其中又以人参内生真菌RP的抑菌活性最强,并且对几种测试菌均有一定的抑菌活性,对金黄色葡萄球菌的相对抑制率最高达到76%。选择活性菌株人参内生真菌RP进行更深入的研究。3.抑菌活性菌株人参内生真菌RP在培养时的较适宜C源为大米,N源为酵母;最适宜的培养温度为24℃,培养到25天时,活性物质产生达到最高值。该菌对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度(MIC)为8μg/mL。通过形态学鉴定该菌株为Phomopsis.sp,5.8S rDNA的PCR测序结果显示,序列长为539bp,该菌株与Preussia flanaganii序列同源性为99%。但他们在形态上却有很大不同,这需要通过结合形态学和分子生物学的对比进一步的研究。4.对菌株RP的活性成分进行了初步的研究。采用大孔树脂柱的方法找到抑菌活性物质的存在部位。发现大部分的活性物质溶于80%-90%的乙醇溶液中。而在80%-90%乙醇溶液收集到的洗脱液中,检测到了有皂甙类成分存在,并对其中的皂甙类成分通过薄层层析法(TLC)进行了初步鉴定,结果在Rf值分别为Rf1=0.3974,Rf2=0.5128,Rf3=0.8846时分离得到了3个点。其中,Rf值为0.3974的点与人参皂甙Re的Rf值相同,说明在菌株RP的发酵液中可能含有人参皂甙Re。