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目的研究天津市耐药结核分枝杆菌rpoB和katG基因的突变情况。籍以探讨结核分枝杆菌对利福平和异烟肼的耐药分子机制。方法60株结核分枝杆菌临床分离株来源于天津市结核病控制中心参比实验室，包括2005年7月份到2006年4月份期间的所有耐利福平和(或)异烟肼的50株存档菌株和2006年1月到2月份的10株对利福平和异烟肼均敏感的存档菌株，药敏试验采用用BACTEC MGIT960系统。菌种鉴定采用PNB和TCH生长实验。用PCR法扩增上述菌株的rpoB和katG基因片段，SSCP法分析该基因片段的突变情况，膜反向斑点杂交法确定其突变位点、对部分菌株的rpoB和katG的PCR产物进行测序，验证其突变位点情况。以结核分枝杆菌标准敏感株H37Rv为对照。结果本实验60株菌株包括利福平耐药株27株，敏感株33株；异烟肼耐药株43株，敏感株17株。1 rpoB基因突变结果采用PCR扩增60株结核分枝杆菌的rpoB基因，均产生305bp的DNA片段，用SSCP方法检测该片段，33株利福平敏感株除1株SSCP图谱与H37Rv不同外其它均相同，27株利福平耐药株中7株SSCP图谱与H37Rv不同。利福平耐药株的突变检出率为26％(7／27)。采用PCR扩增上述7株利福平耐药突变株的rpoB基因，均产生240bp的DNA片段，用膜反向斑点杂交检测以上片段，4株531位TCG→TrG(Ser→Leu)，1株526位CAC→TAC(His→Tyr)，1株516位GAC→GGC(Asp→Gly)和533位CTG→CCG(Leu→Pro)联合突变，1株膜反向斑点杂交未见突变，经测序为526位CAC→CGC(His→Arg)，在rpoB基因的81bp的RRDR区域共发现4个位点5种突变类型。2 kata基因突变结果采用PCR扩增60株结核分枝杆菌的katG基因，除1株异烟肼耐药株扩增阴性外，均产生273bp的DNA片段。用SSCP方法检测上述DNA片段，17株异烟肼敏感株SSCP图谱与H37Rv相同，42株异烟肼耐药株17株SSCP图谱与H37Rv不同。异烟肼耐药株的突变检出率为42％(18／43)。采用PCR扩增上述17株异烟肼耐药突变株的katG基因，均产生273 bp的DNA片段。用膜反向斑点杂交法检测以上片段，13株315位AGC→ACC(Ser→Thr)；1株315位AGC→AAC(Ser→Asn)；2株只能判定315位突变，后经测序分别突变为ACG(Thr)、ACA(Thr)；1株膜反向斑点杂交未见突变，后经测序位306位ACC→CCc(Thr→Pro)，共发现2个位点5种突变类型。结论天津市耐利福平结核分枝杆菌rpoB基因以531位密码子突变为主，耐异烟肼结核分枝杆菌katG基因以315位密码子突变为主，rpoB和katG基因突变分别是结核分枝杆菌对利福平和异烟肼耐药的重要分子机制之一。