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【目的】探究营养胁迫条件下食管鳞癌细胞中ACSS2调控IL-6表达、分泌的分子机制,揭示食管鳞癌细胞来源的IL-6促进肿瘤相关成纤维细胞外泌sPD-L1的作用途径。【方法】(1)通过免疫组化检测50例食管鳞癌患者组织标本中ACSS2的表达情况及分布特征;免疫组化结合免疫荧光共定位技术分析ACSS2与血管内皮标志蛋白CD31之间联系;定量PCR及蛋白印迹法对比检测人正常食管上皮细胞Het-1A与食管鳞癌细胞株TE-1及ECA109在营养胁迫处理不同时间下ACSS2转录和蛋白改变情况;(2)定量PCR及ELISA法检测食管鳞癌细胞营养胁迫处理前后免疫微环境编辑相关因子如IL-6、TGF-β及TNF-α的转录及外泌量改变;通过定量PCR检测不同营养胁迫处理时间下IL-6与ACSS2转录水平改变之间潜在联系;结合靶向干扰ACSS2处理,通过定量PCR、蛋白印迹及ELISA法分别检测营养胁迫处理前后食管鳞癌细胞中IL-6转录、翻译及外泌量变化;基于免疫组化染色进一步探讨食管鳞癌患者组织标本中IL-6与ACSS2表达强度之间的相关性。(3)蛋白印迹法检测在营养胁迫条件下食管鳞癌细胞中ACSS2影响TLR4、MyD88、p-p65、p65等信号蛋白表达情况;营养胁迫结合靶向抑制剂处理通过蛋白印迹法揭示ACSS2与NF-κB信号活化之间联系;ELISA法检测营养胁迫前后干扰ACSS2以及NF-κB抑制剂等处理后IL-6外泌量变化,进一步探讨营养胁迫对ACSS2/NF-κB/IL-6调控轴的影响。(4)流式细胞分析术及蛋白印迹法检测营养胁迫处理前后食管鳞癌细胞中PD-L1的表达情况;通过免疫荧光及免疫组化共定位,检测食管鳞癌组织中PD-L1的表达及分布情况,并进一步探究PD-L1阳性细胞类型及其与ACSS2之间的关系;流式细胞分析术检测肿瘤相关成纤维细胞经营养胁迫处理前后食管鳞癌细胞培养上清后PD-L1的表达改变;蛋白印迹及ELISA法进一步揭示肿瘤相关成纤维细胞中PD-L1表达及外泌变化与食管鳞癌细胞来源IL-6之间的内在联系;通过CCK8检测食管鳞癌细胞调控肿瘤相关成纤维细胞外泌PD-L1的途径以及对CD8~+T细胞的细胞活力的影响。【结果】(1)食管鳞癌组织标本中ACSS2在肿瘤浸润、侵袭、癌栓等部位高表达,其表达程度总体上与血管内皮标志蛋白CD31呈负相关;营养胁迫不同时间处理下,食管鳞癌细胞株ACSS2转录及蛋白表达升高,而正常食管鳞状上皮细胞Het-1A中ACSS2无相关改变。(2)营养胁迫处理后食管鳞癌细胞中IL-6的转录与外泌量均明显上调,TGF-β的转录和外泌水平呈相反趋势,TNF-α的变化无统计学意义;食管鳞癌细胞中IL-6转录及分泌受ACSS2的影响;食管鳞癌组织中IL-6主要表达在肿瘤细胞内,且与ACSS2的表达呈现正相关关系。(3)营养胁迫下食管鳞癌细胞ACSS2引起p-p65上调,而对TLR4、MyD88、p65无明显影响;结合靶向干扰ACSS2、NF-κB信号抑制剂,营养胁迫下食管鳞癌细胞中ACSS2调控NF-κB信号通路活化及IL-6外泌量增加。(4)营养胁迫处理对食管鳞癌细胞PD-L1表达无显著影响;食管鳞癌组织标本中PD-L1阳性细胞为肿瘤相关成纤维细胞细胞;食管鳞癌细胞来源IL-6刺激肿瘤相关成纤维细胞外泌游离型PD-L1;营养胁迫条件下肿瘤相关成纤维细胞外泌游离PD-L1的增加会抑制CD8~+T细胞活力。【结论】营养胁迫条件下,食管鳞癌细胞中ACSS2的表达上调通过NF-κB/IL-6途径诱导肿瘤相关成纤维细胞分泌sPD-L1,从而参与构建免疫逃逸微环境。